کلونینگ و بیانژن (stxB) شیگلا دیسانتری تیپ 1 در باکتریRoestta DE3E. coli

شیگلوزیس یک مسئله جهانی مهم برای سلامتی بشر محسوب می شود. تا به امروز واکسن موثری علیه شیگلا یافت نشده است. یکی از مهمترین فاکتورهای بیماری زای اصلی در شیگلا دیسانتری تیپ 1، انتروتوکسین شیگلا یا ST می باشد که توسط ژن stx کد می شود. شیگا توکسین یک پروتئین شش زیر واحدی با وزن مولکولی 5/70 کیلو دالتون بوده که از یک زیر واحد به نام STxA و یک زیر واحد پنتامریک غیر سمی متصل شونده به رسپتور به نام زیر واحد B یا STxB تشکیل شده است. زیر واحد اخیر باعث اتصال و ورود سم به درون سلول و اثرات آن می شود.STxB یک آنتی ژن کاندید واکسن برای شیگلوزیس محسوب می شود. در این مطالعه با استفاده از توالی ژن stxB بدست آمده از بانک ژنی NCBI طراحی پرایمر صورت گرفت. ژن مورد نظر با استفاده از روش PCR از باکتری شیگلا دیسانتری تیپ 1 تکثیر یافت و در پلاسمید pGEM- T Easy vetorکلون و سپس در وکتور بیانی pET-28a(+) ساب کلون شد. ژن stxBدر باکتری E. coliسویه Rosetta DE3 بیان گردید. پروتئین تولیدی توسط ستون نیکل تخلیص و از لحاظ وزن مولکولی و ایمنوبلاتینگ توسط ژل SDS-PAGE و وسترن بلات مورد تایید قرار گرفت.هدف از انجام این مطالعه تولید پروتئین STxB به منظور استفاده آن در بررسی ایمنی زایی و تولید آنتی بادی پلی کلونال علیه سم شیگلا (شیگا توکسین) بود.