همسانه سازی ژن virG و ساخت سازه جهش یافته pGEMΔvirG به منظور القای نوترکیبی در سویه شیگلا دیسانتری بومی

بیماری شیگلوز از علل عمده ابتلا کودکان به اسهال در ایران است و ژن virG نقش کلیدی را در بیماری زایی و قدرت تهاجم باکتری شیگلا بازی می کند. هدف از این مطالعه، همسانه سازی، توالی یابی ژن virG و ساخت سازه جهش یافته pGEM∆virG به منظور القای نوترکیبی در سویه شیگلا بومی با هدف ساخت سویه کاندید واکسنی زنده تقلیل حدت یافته است.
با استفاده از آزمون های بیوشیمیایی، سویه شیگلای بومی بررسی و ژن virG در حامل pGEM-7zf همسانه سازی و سپس توالی نوکلئوتیدی آن تعیین گردید. بر اساس اطلاعات حاصل از توالی یابی، نقشه برش آنزیمی حامل نوترکیب pGEMvirG استخراج و نسبت به حذف نواحی از ژن virG با استفاده از واکنش هضم آنزیمی اقدام شد. در نهایت، سازه pGEM∆virG با به کار گیری روش شیمیایی به باکتری اشرشیاکلی تراریخت سازی گردید.
سویه شیگلای بومی تایید گردید. توالی یابی ژن virG در پایگاه داده های ژنومیNCBI)) ثبت گردید. سازه pGEM∆virG یک ساختار جهش یافته از ژن virG در باکتری اشریشیاکلی را شامل می شود که 1751 جفت باز از آن، از طریق واکنش هضم آنزیمی حذف شده است.
استفاده از تکنیک تبادل آللی بر پایه بهره گیری از رخداد نوترکیبی در باکتری ها یکی از موثرترین روش های ایجاد گسستگی در ژن های هدف می باشد. این ساختار جهش یافته می تواند به منظور ایجاد سویه کاندید واکسنی زنده تقلیل حدت یافته شیگلا دیسانتری مورد استفاده قرار گیرد.