شناسایی پروتئین های موجود در فیلترای کشت مایکوباکتریوم توبرکلوزیس سویه DT و مقایسه ی آن با پروتئین های توبرکولین انسانی توسط روش های الکتروفورتیک

توبرکولین حاوی پروتئین های موجود در محیط کشت باکتری سل می باشد که توسط تری کلرواستیک اسید(TCA) و یا آمونیوم سولفات رسوب داده شده اند و جهت تشخیص آلودگی به باکتری سل از آن استفاده می شود. هدف از انجام این مطالعه مقایسه ی توبرکولین انسانی تولیدی در موسسه سرم سازی رازی با پروتئین های موجود در فیلترای کشت مایکوباکتریوم توبرکلوزیس می باشد.
ابتدا باکتری از محیط کشت جامد لونشتاین جانسون توسط محیط دوفازی به محیط مایع دورس هنلی منتقل شد و پس از رشد آن به مدت 6 هفته، باکتری ها توسط فیلتر 22/0 میکرون از محیط کشت مایع حاوی پروتئین های ترشحی جدا شدند. سپس محلول حاوی پروتئین های ترشحی به صورت جداگانه توسط TCA و سولفات آمونیوم ترسیب شدند. سپس توسط اسپکتروفوتومتر و پروتئین سنجی کجلدال، وجود پروتئین در نمونه های ترسیب شده تائید گردید. در انتها پروتئین های ترسیب شده توسطSDS-PAGE و رنگ آمیزی کوماسی بلو با توبرکولین انسانی استاندارد مقایسه شدند.
نمونه ترسیب شده با TCA دارای باندهای بیشتری در محدوده ی بالاتر از 20 کیلودالتون بود، در حالی که نمونه ترسیب شده با سولفات آمونیوم دارای باندهای بیشتری در محدوده ی پایین تر از 20 بود. همچنین پروتئین های توبرکولین انسانی نیز بصورت اسمیر و دارای وزن کمتر از 16 کیلودالتون بودند.
نتایج ما نشان داد که سولفات آمونیوم نسبت به TCA، ترسیب کننده ای مناسب تر برای پروتئین های با وزن مولکولی پایین باشد.