کلون و بیان پروتئین سطحی 31 کیلو دالتونی بروسلا ملیتنسیس در اشریشیاکلی

بروسلوز بیماری مشترک بین انسان و دام است که از لحاظ اقتصادی و بهداشتی دارای اهمیت می باشد. پیشگیری از موارد جدید بیماری در انسان و دام برای ریشه کنی بروسلوز لازم و ضروری است.از مهمترین روش های پیشگیری استفاده از یک واکسن موثر و کم ضرر است. برای این منظور باید اقدام به شناسایی و ارزیابی ایمونولوژیکی انتی ژن های مختلف سلول بروسلا نمود. هدف از این تحقیق کلون و بیان پروتئین سطحی 31 کیلودالتونی بروسلا ملی تنسیس می باشد.
در این مطالعه ژن پروتئین سطحی 31 کیلو دالتونی بروسلا ملی تنسیس کلون بیان شد. ابتدا ژن مورد نظر با پرایمر های اختصاصی و انزیم پرایمر استار تکثیر و در وکتور pJET1/2 کلون شد. قطعه هدف از وکتور تایید شده بوسیله انزیم های محدود الاثر طراحی شده روی پرایمر ها خارج و در وکتور (+) pET28a ساب کلون گردید.پلاسمید حاوی ژن هدف، پس از تایید در اشرشیاکلی بی ال 21(دی ای 3) ترانسفورم و تولید پروتئین نوترکیب با ای پی تی جی 1 میلی مولار القا شد.
این ژن حاوی 329 اسید امینه بود و محصول PCR نیز 1008 کیلو دالتون بود که نتایج اس دی اس – پیچ و وسترن بلات نشان دهنده صحت کلونینیگ و بیان پروتئین مورد نظر می باشد. و وسترن بلات نشان دهنده صحت کلونیتیگ و بیان پروتئین مورد نظر می باشد.
با تلخیص نوترکیب حاصل و ارزیابی ایمنی زایی ان می توان از ان به عنوان یک کاندید واکسن استفاده نمود.