انتقال ژن لوسیفراز حشره شب تاب(Lampyris turkestanicus) به کلزا (Brassica napus L.)

پیشرفت های اخیر در زیست شناسی مولکولی و زیست فناوری گیاهی تصور عمومی را در مورد کاشت گیاهان به صورت سنتی و فقط به عنوان یک منبع غذایی به سمت اینکه گیاهان به عنوان کارخانه های زیستی جهت تولید پروتئین های نوترکیب و دارویی استفاده شوند تغییر داده است. زراعت مولکولی«Molecular farmig» به تولید پروتئین های نوترکیب (اعم از دارویی و آنزیم های صنعتی ارزشمند) در گیاهان از طریق مهندسی ژنتیک اطلاق می شود. آنزیم لوسیفراز حشره شب تاب یکی از مهمترین آنزیم های صنعتی است که به طور وسیعی در زمینه های مختلف زیست فناوری و زیست شناسی سلولی و مولکولی بویژه در تشخیص میزان ATP به منظور تشخیص آلودگی های میکروبی، تهیه کیت های تشخیص سرطان، غربالگری داروها، زیست حسگرها، سنجش های آنزیمی به عنوان ژن گزارشگر و در توالی یابیDNA (Pyrosequencing) استفاده می شود. تحقیق حاضر جهت انتقال ژن لوسیفراز حشره شب تاب جدایه ایرانی Lampyristurkestanicusبه گیاه کلزا انجام گرفت. در این تحقیق، ژن لوسیفراز حشره شب تاب (LUC) که تحت پیشبرنده 35S ویروس موزائیک کلم (CaMV35S)در پلاسمیدpCAMBIA1304 همسانه سازی شده بود، به اگروباکتریوم سویه LBA4404 منتقل و به وسیله Colony PCR و با آغازگرهای اختصاصی تایید شد. سپس پلاسمید نوترکیب شامل ژن لوسیفراز حشره شب تاب (LUC) به روش مبتنی بر اگروباکتریوم به گیاه کلزا منتقل گردید. برای تراریخت سازی، ریزنمونه های لپه ای گیاه کلزا رقم PF4570/91 مورد استفاده قرار گرفت. جهت تعیین آستانه تحمل گیاه کلزا به آنتی بیوتیک هیگرومایسین، غلظت های مختلف این آنتی بیوتیک مورد بررسی قرار گرفت. گیاهان تراریخت بر روی محیط MS حاوی آنتی بیوتیک هیگرومایسین انتخاب شدند و سپس به محیط های طویل شدن شاخه و ریشه زایی انتقال یافتند. آنالیز PCR گیاهان حضور ژن لوسیفراز حشره شب تاب را در گیاهان کلزای تراریخت تایید نمود.