طراحی کیت ELISA غیر مستقیم به منظور شناسایی هم زمان آنتی بادی بر علیه بروسلوز در گاو و انسان آلوده

بروسلوز یک بیماری مشترک بین انسان و دام است که انتشار جهانی دارد و از بیماری های آندمیک شناخته شده در ایران است. تشخیص سریع و مناسب این بیماری نقش موثری در بهبود بهداشت عمومی دارد. هدف از این تحقیق، طراحی یک کیت Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) غیر مستقیم جهت تشخیص هم زمان بروسلوز در انسان یا دام آلوده بود که بتواند به عنوان جایگزینی مناسب جهت SAT و کیت های وارد شده از کشورهای خارجی به کار رود.
در این تحقیق از لیپوپلی ساکارید صاف (Smooth lipopolysaccharide یا S-LPS) بروسلا آبورتوس و بروسلا ملی تنسیس که به صورت تجاری و با خلوص بالا تهیه شده بودند به عنوان آنتی ژن جهت کوت کردن میکروپلیت ها استفاده شد. روش ELISA غیر مستقیم بر روی 129 نمونه ی سرمی شامل 51 نمونه ی سرم انسانی (10 نمونه سرم مثبت و 41 نمونه سرم منفی) از بیماران مراجعه کننده به آزمایشگاه های تشخیصی طبی تهران، ساری، همدان و 78 نمونه سرم دامی(30 نمونه سرم مثبت و 48 نمونه سرم منفی) از نمونه های فرستاده شده به آزمایشگاه های دامپزشکی در استان البرز صورت گرفت. تمام سرم ها با روش آگلوتیناسیون لوله ای استاندارد (Serum agglutination test یا SAT) مورد ارزیابی قرار گرفتند.
همه ی 40 نمونه ی سرم (10 نمونه سرم انسانی و 30 نمونه سرم دامی) که با تست Wright مثبت گزارش شده بودند، با کیت ELISA طراحی شده نیز نتایج مثبتی داشتند. از 89 نمونه ی سرم منفی (41 نمونه سرم انسانی و 48 نمونه سرم دامی)، 86 نمونه نتیجه ی منفی نشان دادند. در این مطالعه حساسیت و ویژگی برای کیت دامی به ترتیب 100 و 83/95 درصد و برای کیت انسانی به ترتیب 100 و 56/97 درصد بود. مقدار حساسیت و ویژگی برای کیت ترکیبی طراحی شده 100 و 73/96 درصد بود. بر همین اساس میزان حد آستانه یا (Cut off) نیز 13/0 تعیین گردید.
این کیت به دلیل استفاده از دو کونژوگه، توانایی شناسایی بروسلوز در دام یا انسان آلوده را به طور هم زمان دارد. دقت، حساسیت و ویژگی بالا به همراه سرعت انجام آزمایش از مزایای این روش در مقایسه با سایر تست های سرولوژیکی است.