مقایسه بیان شکل تغییر یافته BMP-7 در میزبان های پروکاریوتی و یوکاریوتی

BMP-7 عامل رشد چند منظوره ای است که اغلب به دلیل خواص استخوان زایی خود شناخته شده است. به دلیل قیمت بالا، دسترسی به این پروتئین برای مصارف درمانی محدود است. تاکنون تولید هترولوگ پروتئین نوترکیب BMP-7 در تعدادی از سیستم های بیانی انجام یافته است. در مطالعه حاضر شکل جدیدی از پروتئین در میزبان های پروکاریوتی و یوکاریوتی بیان شده است.
برای بیان در سیستم بیانی پروکاریوتی، پروتئین جدید به فضای پری پلاسمی باکتری اشریشیا کلی ترشح شد و تخلیص توسط ستون تمایلی انجام گرفت. برای بیان در سیستم بیانی یوکاریوتی، قطعه cDNA با طول کامل به سلول یوکاریوتی CHO منتقل شد و کلون های پایدار انتخاب شد. بیان پروتئین نوترکیب در هر دو سیستم بیانی توسط آزمون وسترن بلات تایید شد.
پروتئین نوترکیب جدید به صورت دایمر با وزن مولکولی 36-38 کیلودالتون در سلول یوکاریوتی و به صورت مونومر با وزن مولکولی 16 کیلودالتون در سیستم بیانی اشریشیا کلی تولید شد. تجزیه و تحلیل کمی با استفاده از الایزا نشان داد که سطح بیان جهش یافته در سیستم بیانی یوکاریوتی و پروکاریوتی به ترتیب 40 و 135 نانوگرم در هر میلی لیتر از محیط کشت است.
در این مطالعه سطح بیان پروتئین در اشریشیا کلی حداقل 3 برابر میزان بیان در سلول یوکاریوتی بود. با این وجود بهینه سازی های بیشتر برای به دست آوردن مولکول دایمر در اشریشیا کلی مورد نیاز است. نتایج مطالعه مذکور نشان داد که بیان پری پلاسمی ممکن است برای تولید پروتئین های پیچیده مانند BMPs مناسب باشد.
کلیدواژگانپروتئین نوترکیب؛ پروتئین استخوان زای انسانی رده 7؛ رده سلولی CHO؛ اشریشیا کلی