طراحی واکنش زنجیره ای پلی مراز(PCR) جهت تشخیص مولکولی باکتری هموفیلوس آنفلوانزا

هموفیلوس آنفلوانزا مهم ترین عامل بیماری مننژیت در نوزادان و کودکان زیر 5 سال است. از این رو تشخیص سریع این عامل ضروری است. مطالعات نشان داده است که روش های مولکولی، تست های اختصاصی برای تشخیص سریع این عامل هستند. هدف این مطالعه، طراحی روش PCR جهت تشخیص سریع باکتری هموفیلوس آنفلوانزا بود.

در این مطالعه پرایمر های اختصاصی بر اساس ژن ompp6 طراحی و واکنش PCR راه اندازی شد. جهت ساخت کنترل مثبت استاندارد، محصول PCR در وکتور pTZ57R/T کلون گردید. حضور ژن مورد نظر در T- وکتور به وسیله پروسه های هضم آنزیمی و توالی یابی تایید شد. حساسیت واکنش PCR، از طریق تهیه رقت های متوالی 1 به 10 از پلاسمید کنترل مثبت با غلظت اولیه 11 نانوگرم، تعیین شد. ویژگی واکنش با PCR بر روی DNAژنومیک طیفی از باکتری ها ارزیابی شد.
یافته های پژوهش: نتایجPCR، باند مورد انتظار با اندازه 280 جفت بازی را نشان داد. نتایج حساسیت، مشخص کرد که کمترین حد تشخیصی واکنش 317 کپی است. هیچ گونه تکثیری پس از PCRبر روی DNA ژنومیک باکتری های کنترل منفی مشاهده نگردید. این نتیجه ویژگی واکنش PCR را تایید نمود.

نتایج این مطالعه نشان داد که PCR ژن ompp6 باکتری هموفیلوس آنفلوانزا روشی با حساسیت و ویژگی بالا است و می تواند به عنوان ابزاری در تشخیص سریع مننژیت ناشی از این باکتری به ویژه در موارد مصرف آنتی بیوتیک توسط بیمار در آزمایشگاه های تشخیصی باشد.