افزایش بیان عامل فعال کننده پلاسمینوژن بافتی نوترکیب در سلول های CHO با استفاده از ناقل بیانی حاوی نواحی متصل شونده به ماتریکس و روش فعال سازی راه انداز

ایجاد رده های سلولی دارای بیان بالا یک مرحله محدود کننده اصلی در روند تولید پروتئین های نوترکیب دارویی است. در این مطالعه اثر به کارگیری ناحیه متصل شونده به ماتریکس ژن اینترفرون بتای انسانی به همراه روش فعال سازی راه انداز از طریق پروتئین E1A 13S بر بیان فاکتور فعال کننده پلاسمینوژن بافتی (t-PA) در سلول های تخمدان هامستر چینی بررسی شده است.
ناحیه متصل شونده به ماتریکس در سمت ́5 و ́3 واحد بیان کننده t-PA در ناقل pTPA کلون شد تا ناقل pMTPA به دست آید. پس از ترانسفکشن سلول ها با ناقل های pTPA و pMTPA، رده های سلولی پایدار ایجاد شده و میزان بیان t-PA برای هر رده تعیین شد. در مرحله بعد، پلاسمید بیان کننده E1A 13S به سلول های پایدار ترانسفکت شده و میزان بیان t-PA پس از 72 ساعت اندازه گیری شد.
الحاق ناقلین pTPA و pMTPA به ژنوم سلول CHO از طریق انجام PCR روی DNA ژنومی سلول های پایدار تایید شد. بررسی میزان بیان t-PA افزایش بیان به میزان سه برابر را در سلول های ترانسفکت شده با ناقل pMTPA در مقایسه با رده ایجاد شده با pTPA نشان داد. بیان موقتی E1A 13S در رده های پایدار منجر به افزایش تیتر t-PA به 1771 واحد در هر میلی لیتر در سلول های ایجاد شده با ناقل pMTPA شد.
نتایج این تحقیق نشان دهنده آنست که به کارگیری ناحیه متصل شونده به ماتریکس در ناقل بیانی به همراه روش فعال سازی راه انداز می تواند به صورت موثر میزان بیان پروتئین های نوترکیب در سلول های CHO را افزایش دهد.