بیان و تخلیص پروتئین همراه نوروتوکسین (HA-33/A) کلستریدیوم بوتولینوم تیپ A و بررسی قابلیت آنتی ژنی آن

کمپلکس های نوروتوکسین بوتولینوم (BoNT) از نوروتوکسین و پروتئین های همراه با نوروتوکسین تشکیل شده اند. هماگلوتینین-33 (HA-33) یکی از اعضای کمپلکس نوروتوکسین بوتولینوم تیپ A (BoNT/A) می باشد. با توجه به نقش حفاظتی HA-33 در حفاظت از BoNT/A در برابر شرایط نامساعد معده - روده ای و همچنین نقش ادجوانتی آن، تولید نوترکیب این پروتئین باارزش می باشد. بنابراین در این مطالعه HA-33 بیان و تخلیص شد و سپس قابلیت آنتی ژنی آن در موش مطالعه شد.
ابتدا توالی ژن ha-33 کلستریدیوم بوتولینوم تیپ A از بانک ژنی (GenBank) گرفته شد. توالی ژنی بهینه سازی و در وکتور pET28a(+) سنتز شد. سپس سویه (DE3) E. coli BL21 با استفاده از وکتور نوترکیب ترانسفورم شد و بیان پروتئین HA-33 در دمای 37 درجه سانتی گراد و زمان القای 5 ساعت بهینه شد.
پروتئین نوترکیب با استفاده از کروماتوگرافی تمایلی nickel nitrilotriacetic acid agarose تخلیص و با استفاده از ایمونوبلاتینگ تایید شد. همچنین واکنش الیزا نشان داد که این پروتئین باعث تولید آنتی بادی با تیتر بالایی در موش شده است.
نتایج نشان داد که بیان و تخلیص بالای این پروتئین نوترکیب، باعث افزایش تیتر بالای آنتی بادی در موش شده است.