کلونینگ و بیان آنتی ژن LipL32 لپتوسپیرائی به عنوان کاندیدی برای تشخیص سریع بیماری

Print یکی از مشکلات اصلی در بیماری لپتوسپیروزیس، دشواری تشخیص آن است که باعث شده این بیماری به عنوان یک چالش در سلامت انسان و دام مطرح باشد. با توجه به مشکلات موجود در آزمون آگلوتیناسیون میکروسکوپی (MAT) که روش معمول در تشخیص این عفونت است، تلاش های فراونی در جهت طراحی و اجرای روش های دقیق و سریع تشخیصی انجام شده است. با توجه به این که پروتئین غشای خارجیLipL32 می تواند به عنوان کاندید مناسبی برای مصارف تشخیصی محسوب شوند، در این مطالعه قصد بر این است که این آنتی ژن را کلون و بیان نماییم.
ابتدا ژن LipL32 بوسیله پرایمرهای اختصاصی و روش PCR تکثیر گردید و سپس در داخل وکتور بیانی pQE30 کلون گردید و با استفاده از آزمون های کنترلی جهت قرار گیری قطعه مربوطه مورد تایید قرار گرفت. برای بیان پروتئین مورد نظر، پلاسمید نوترکیب ایجاد شده در درون میزبان مناسب (E.coli M15)، وارد و سپس بیان شد.
پروتئین بیان شده با استفاده از آزمون الکتروفورز SDS-PAGE مورد بررسی قرار گرفت و با تکنیک وسترن بلاتینگ و استفاده از آنتی بادی های اختصاصی، تائید شد.
پروتئین نوترکیب LipL32 با موفقیت در سیستم پروکاریوتی بیان گردید. این پروتئین را می توان در جهت طراحی روش های تشخیصی در عفونت های ناشی از لپتوسپیرا در دام یا انسان مورد استفاده قرار داد.