بیان ژن فیتاز گونه های باسیلوس جداشده از خاک نواحی غرب مازندران به روش PCR

شناسایی و به کارگیری فیتاز جداشده ازمیکروارگانیسم های موجود در خاک، اهمیت زیادی در تولید این آنزیم به منظور استفاده تجاری در صنایع مختلف دارد.این مطالعه به منظور شناسایی گونه های باسیلوس تولید کننده آنزیم فیتاز و جداسازی ژن تولید کننده این آنزیم صورت گرفت.
نمونه برداری از خاک های مختلف مناطق کوهستانی شهرستان تنکابن انجام شد. جداسازی اولیه باسیلوس در محیط غنی Bacillus Medium Agar صورت پذیرفت. بعد از جداسازی باکتری ها و استخراج ژنوم باکتری، با استفاده از پرایمر اختصاصی ژن تولید کننده آنزیم شناسایی شده و نسخه های زیادی از این ژن با روش PCR تکثیر شد. با استفاده از بررسی های تکمیلی ازجمله SDS-PAGE وسنجش فعالیت آنزیمی اندازه این پروتئین وشرایط بهینه تولید آن ارزیابی گردید.
از 40 نمونه خاکی که مورد آزمایش قرار گرفتند یک باکتری ترشح کننده آنزیم فیتاز جداسازی شد و این باکتری مورد توالی یابی قرار گرفت و گونه باسیلوس سوبتلیس سویه اس تی آر تشخیص داده شد. اندازه پروتئین فیتاز تولید شده از این ژن در حدود 45 کیلو دالتون بوده و فعالیت آنزیم در دمای 55 درجه در حدود 1/. در طول موج 415 نانومتر به دست آمد. ژن فیتاز با اندازه حدود bp1200 تکثیر صورت گرفت.
با توجه به اینکه میکروارگانیسم های تولید کننده آنزیم فیتازدرشرایط محیطی طبیعی آنزیم را در مقادیر محدود و با کارائی و کیفیتی در سطوح میکروارگانیسم تولید می کنند، بنابرابن شناسایی وجداسازی باسیل های تولید کننده فیتاز و تخلیص این پروتئین از اهمیت ویژه ای برخوردار می باشد.