طراحی و بهینه سازی روش PCR تک واکنشی چندگانه ی آشیانه ای به منظور غنی سازی محصول PCR در تشخیص بروسلا

باکتری جنس بروسلا یکی از عوامل اصلی بیماری های مشترک انسان و دام است. تشخیص گونه های بیماریزا در کشورهای مختلف حایز اهمیت است. در این بررسی سه نوع نمونه شامل باکتری خالص، شیر و سرم بیماران مشکوک به بروسلوز مورد بررسی مولکولی قرار گرفت. آزمونها روی 30 نمونه خون بیمار مبتلا به بروسلوز و همچنین 100 نمونه شیر جمع آوری شده از دامداران سنتی که به طور تصادفی انتخاب شده بود؛ انجام و برای تایید دو نمونه از محصولات واکنش PCR تعیین توالی شد. استخراج DNA با به کارگیری روش SDS/NET/Proteinase-k و سپس فنل – کلروفرم انجام شد. وجود بروسلا ملی تنسیس در 22 مورد (3 /73 درصد) بیمارانی که تستهای سرولوژی مثبت بروسلوز داشتند و 14 نمونه از شیرهای جمع آوری شده (14 درصد) تایید شد؛ هرچند مثبت بودن تست های مولکولی در حیوانات واکسینه شده نیز باید در نظر گرفته شود. با بهکارگیری پرایمرهای اختصاصی برای تکثیر یک ناحیه از ژن omp31 گونه های مختلف بروسلا در واکنش PCR اول و در پی آن به کارگیری پرایمر بسیار اختصاصی داخلی برای بروسلا ملی تنسیس، واکنشی با حساسیت بسیار بالا بهینهسازی شد. در پایان شرایط به گونه ای طراحی گردید که تمام پرایمرها در یک واکنش به تغلیظ محصولی با طول تقریبا برابر (به ترتیب 136 و 128 جفت باز) که در ژل آگارز همپوشانی دارند، کمک کند. در مجموع، در این بررسی یک روش ساده با حساسیت بالا طراحی شد و به نظر می رسد این روش در مقایسه با روش های دیگر ابزار مفیدی برای تشخیص بروسلوز انسانی و حیوانی در سطح آزمایشگاه های نه چندان مجهز باشد.