طراحی و بهینه سازی روش PCR تک واکنشی چندگانه ی آشیانه ای به منظور غنی سازی محصول PCR در تشخیص بروسلا
نویسنده:
چکیده:
باکتری جنس بروسلا یکی از عوامل اصلی بیماری های مشترک انسان و دام است. تشخیص گونه های بیماریزا در کشورهای مختلف حایز اهمیت است. در این بررسی سه نوع نمونه شامل باکتری خالص، شیر و سرم بیماران مشکوک به بروسلوز مورد بررسی مولکولی قرار گرفت. آزمونها روی 30 نمونه خون بیمار مبتلا به بروسلوز و همچنین 100 نمونه شیر جمع آوری شده از دامداران سنتی که به طور تصادفی انتخاب شده بود؛ انجام و برای تایید دو نمونه از محصولات واکنش PCR تعیین توالی شد. استخراج DNA با به کارگیری روش SDS/NET/Proteinase-k و سپس فنل – کلروفرم انجام شد. وجود بروسلا ملی تنسیس در 22 مورد (3 /73 درصد) بیمارانی که تستهای سرولوژی مثبت بروسلوز داشتند و 14 نمونه از شیرهای جمع آوری شده (14 درصد) تایید شد؛ هرچند مثبت بودن تست های مولکولی در حیوانات واکسینه شده نیز باید در نظر گرفته شود. با بهکارگیری پرایمرهای اختصاصی برای تکثیر یک ناحیه از ژن omp31 گونه های مختلف بروسلا در واکنش PCR اول و در پی آن به کارگیری پرایمر بسیار اختصاصی داخلی برای بروسلا ملی تنسیس، واکنشی با حساسیت بسیار بالا بهینهسازی شد. در پایان شرایط به گونه ای طراحی گردید که تمام پرایمرها در یک واکنش به تغلیظ محصولی با طول تقریبا برابر (به ترتیب 136 و 128 جفت باز) که در ژل آگارز همپوشانی دارند، کمک کند. در مجموع، در این بررسی یک روش ساده با حساسیت بالا طراحی شد و به نظر می رسد این روش در مقایسه با روش های دیگر ابزار مفیدی برای تشخیص بروسلوز انسانی و حیوانی در سطح آزمایشگاه های نه چندان مجهز باشد.
کلیدواژگان:
زبان:
فارسی
در صفحه:
33
لینک کوتاه:
magiran.com/p1266254
دانلود و مطالعه متن این مقاله با یکی از روشهای زیر امکان پذیر است:
اشتراک شخصی
با عضویت و پرداخت آنلاین حق اشتراک یکساله به مبلغ 1,390,000ريال میتوانید 70 عنوان مطلب دانلود کنید!
اشتراک سازمانی
به کتابخانه دانشگاه یا محل کار خود پیشنهاد کنید تا اشتراک سازمانی این پایگاه را برای دسترسی نامحدود همه کاربران به متن مطالب تهیه نمایند!
توجه!
- حق عضویت دریافتی صرف حمایت از نشریات عضو و نگهداری، تکمیل و توسعه مگیران میشود.
- پرداخت حق اشتراک و دانلود مقالات اجازه بازنشر آن در سایر رسانههای چاپی و دیجیتال را به کاربر نمیدهد.
In order to view content subscription is required
Personal subscription
Subscribe magiran.com for 70 € euros via PayPal and download 70 articles during a year.
Organization subscription
Please contact us to subscribe your university or library for unlimited access!