بیان و تخلیص دو پروتئین نوترکیب DnaK و Omp31 بروسلا ملی تنسیس و جداسازی اندوتوکسین همراه آن ها

امروزه به دلیل مشکلاتی که سوش واکسن بروسلا ملی تنسیس ایجاد می کند، توسعه واکسن ساب یونیتی با استفاده از پروتئین های نوترکیب مد نظر است. علی رغم به دست آمدن پروتئین های نوترکیب با بیش تر از 95 درصد خلوص، این پروتئین ها هنوز حاوی میزان زیاد و مشخصی از اندوتوکسین هستند. اندوتوکسین ها، لیپوپلی ساکاریدهایی همراه با غشاء بیرونی باکتری های گرم منفی هستند. سمیت ذاتی این لیپوپلی ساکاریدها دارای یک اثری شاخص بر روی رخدادهای بیوشیمیایی بعضی از سلول ها از جمله سلول های ایمنی هستند و می توانند در آزمایش های انجام شده در شرایط آزمایشگاه تداخل ایجاد کنند.
پلاسمیدهای بیانی حاوی دوژن dnakوomp31 به درون باکتریDE3)E.coli Bl21)ترانسفورم شد. بعد پس از انتخاب کلونی مناسب با استفاده از روش وسترن بلات محلولیت و عدم محلولیت هر کدام معین شد. سپس بعد از بیان در 20 درجه به مدت 22 ساعت با استفاده از روش Ni-NTA آگاروز و روش تخلیص با استفاده از اوره، پروتئین های نوترکیب تخلیص گردید. در هنگام شستشو Ni-NTA agarose هم از روش همراه با دترجنت Triton X-114 و هم بدون آن (استاندارد) استفاده شد.
در این مطالعه میزان 20 و 8 میلی گرم از پروتئین های نوترکیب DnaK و Omp31 به ترتیب با استفاده از روش استاندارد به دست آمد در حالی که در روشی که دترجنت استفاده شده بود، این میزان 20 درصد افت داشت. اما در عوض میزان اندوتوکسین در محصول نهایی به میزان بسیار زیادی جدا شده بود و به کمتر از EU 05/0 میلی گرم در لیتر رسید.
روش به کار رفته در این مطالعه می تواند به عنوان روشی مناسب به منظور بیان، تخلیص و جدا سازی از محصول پروتئین نوترکیب نهایی برای تمام پروتئین های با خصوصیات فیزیولوژیکی مشابه به کار رود.