بر همکنش فرم نوترکیب تیوردوکسین ردوکتاز وابسته به NADPH (NTR) از گیاه برنج با تیوردوکسین(Trx) از دو منشا گیاهی و باکتریایی

حفظ تعادل شرایط اکسیداسیون- احیا (ردوکس) در سلول برای انجام متابولیسم های مختلف سلولی و فعالیت مسیرهای انتقال پیام بسیار حیاتی است. در موجودات زنده مکانیسم های مختلف مولکولی در حفظ این تعادل نقش دارند. سیستم تیوردوکسین وابسته بهNADPH سیستمی متشکل از تیوردوکسین ردوکتاز وابسته بهNADPH، تیوردوکسین و NADPH می باشد که نقش مهمی در انتقال الکترون از NADPH به باندهای دی سولفیدی در بسیاری از پروتئین های سلولی دارد و بدین ترتیب با تنظیم تبادلات تیول-دی سولفید درحفظ تعادل ردوکس سلولی دخالت دارد. در تحقیق حاضر توالی ژن کد کننده ی یکی از ایزوفرم های NTRاز گیاه برنج که قبلا OsNTRB نامیده شده بود، در ناقل بیانی pET28a به همراه شریک الحاقی His6-tag همسانه سازی و پلاسمید نوترکیب به میزبان بیانی اشرشیا کلی ((E.coli سویه Rosetta (DE3) منتقل شد. مقدار قابل توجهی از فرم نوترکیب این پروتئین پس از القا محیط کشت باکتری با IPTG تولید و با استفاده از کروماتوگرافی جذبی خالص سازی شد. بیان هترولوگ و خالص سازی فرم نوترکیب OsNTRB امکان بررسی برهمکنش این پروتئین را با دو تیوردوکسین موجود از دو منشا مختلف گیاه جو (HvTrxh1) و باکتری اشرشیاکلی (EcTrx) فراهم ساخت. نتایج نشان داد فرم نوترکیب OsNTRB در محیط این ویترو فعال بوده و در حضور NADPH می تواند هر دو تیوردوکسین گیاهی و باکتریایی را احیا نماید. با این حال سرعت برهمکنش آن با تیوردوکسین HvTrxh1 بسیار بالاتر از EcTrxبوده و تفاوت قابل توجهی نشان داد.