تشخیص گونه های کریپتوسپوریدیوم جدا شده از انسان با روش PCR-RFLP در تهران

کریپتوسپوریدیوزیس از عفونت های انگلی شایع در ایران و به عنوان عامل ایجاد اسهال در انسان و دام به شمار می آید. از این رو شناسایی گونه های شایع آن در جمعیت های انسانی ضروری است. هدف از انجام مطالعه حاضر تعیین گونه های کریپتوسپوریدیوم جدا شده از بیماران مراجعه کننده به سه بیمارستان در تهران بر مبنای ژن 18s rRNA با استفاده از روش Nested PCR-RFLP است.
مطالعه حاضر از نوع توصیفی- مقطعی بوده و در مرحله اول جمعا 1128 نمونه مدفوع انسانی از بیماران مراجعه کننده به سه بیمارستان علی اصغر، مفید و امام خمینی در تهران جمع آوری شد. سپس نمونه ها با روش اسید فاست تغییر یافت و رنگ آمیزی و تشخیص داده شد. در مرحله دوم DNA نمونه های مثبت استخراج و ژنs rRNA 18 با روش Nested-PCR تکثیر، سپس برای تشخیص گونه، محصول PCR با آنزیم محدود کننده Vsp1 برش داده شد در نهایت محصول PCR تعیین ترداف شد.
از نمونه های رنگ آمیزی شده با ذیل نلسون تعداد 12 نمونه (06/1 درصد) مثبت تشخیص داده شد. همه این نمونه ها با روش Nested-PCR تایید شد. قطعه تکثیر یافته 845 جفت بازی ژن 18s rRNA با آنزیم Vsp1 برش داده شد. پس از برش آنزیمی روی ژل آگارز 5/2 درصد، 10 نمونه به عنوان کریپتوسپوریدیوم پاروم و بر مبنای الگوی برش آنزیمی و ترادف بازی یک نمونه به عنوان کریپتوسپوریدیوم آندرسونی و یک نمونه به عنوان کریپتوسپوریدیوم هومنیس تشخیص داده شد.
گرچه گونه پاروم به عنوان گونه شایع در انسان ها شناخته شده است ولی ممکن است افراد به گونه هومنیس و آندرسونی نیز مبتلا شوند.