مقایسه روش PCR با روش استاندارد MPN جهت تشخیص آلودگی باکتریایی در آب شرب

تشخیص آلودگی میکروبی آب شرب به روش کشت علاوه بر هزینه بری، زمان بر بوده و بر حسب میزان آلودگی چند روز به طول می انجامد. این درحالی است که شهروندان در این زمان از آب مورد بررسی استفاده می نمایند. روش های ملکولی دارای حساسیت و سرعت عمل بالایی و زمان عملیاتی کمتری هستند. در این تحقیق روش Multiplex PCR جهت ارزیابی سریع میکروبی آب از نظر کلی فرم، Ecoli و تشخیص احتمالی باکتری های VBNC در آزمایشگاه باکتریولوژی شرکت آب و فاضلاب استان مرکزی و مرکز تحقیقات سل و عفونی کودکان در فاز عملیاتی اجرا گردید.
تشخیص سریع کلی فرم با کمک آمپلی فیکاسیون ژن های lacZ و uidA در واکنش Multiplex PCR طراحی و اجرا گردید. 80 نمونه آب شرب شهر اراک شامل 41 نمونه چاه، 36 نمونه شبکه و 3 نمونه مخزن در این بررسی جمع آوری شده و با استفاده از آمپلی فیکاسیون ژن های lacZ و uidA مورد آزمایش Multiplex PCR قرار گرفتند. همچنین آزمایش MPN به عنوان روشی استاندارد و جهت مقایسه یافته ها، روی تمامی نمونه ها انجام شد. روش های Multiplex PCR و MPNروی باکتری استاندارد، باکتری های خالص شده از نمونه های MPN مثبت و نیز CRM(Certificated Reference Material، (سویه مرجع) انجام گردیدند.
در نمونه های چاه، شبکه و مخزن، اکثر نمونه ها در هر دو روش نتایج مشابه را نشان دادند. نتیجه PCR روی باکتری استاندارد، کشت های خالص شده نمونه های MPN مثبت و CRM نیز تایید کننده روش PCR بود. پنج نمونه دارای PCR مثبت و نتیجه MPN منفی گزارش شدند. زمان کل عملیات PCR با تغییر فاکتورها به حدود یکصد و پنج دقیقه کاهش یافت.
روش Multiplex PCR، امکان شناسایی همزمان باکتری های کلی فرم کل و اشرشیاکلی را در آب آشامیدنی فراهم نمود.