مقایسه دو روش متفاوت انجماد شیشه ای بافت تخمدان موش نابالغ با استفاده از رنگ آمیزی تریپان بلو

محلولهای انجمادی متفاوتی برای انجماد بافت تخمدان بیمارانی که در معرض خطر ناباروری هستند، استفاده می گردد. اتیلن گلایکول، دی متیل سولفوکساید و پروپاندیول، با خاصیت تشکیل کریستالهای یخ کمتر بعنوان محلولهای انجمادی نفوذپذیر پایه ای در مقایسه با انواع دیگر توصیه شده اند. در مطالعه حاضر اثرات دو روش انجماد شیشه ای متفاوت بر روی بافت کامل تخمدان موش نابالغ با استفاده از رنگ آمیزی تریپان بلو بررسی شد.
تخمدان موشهای 8 روزه نژاد NMRI، پس از جداسازی در گروه های کنترل غیر انجمادی، انجمادی 1 و انجمادی 2 دسته بندی شدند. محلول انجمادی 1 از، محیط پایه α-MEM، اتیلن گلایکول 15درصد، دی متیل سولفوکساید 15 درصد، سرم جنین گاوی 20 درصد و محلول انجمادی 2، از محیط پایه α-MEM، اتیلن گلایکول 20 درصد، پروپاندیول 20 درصد و سرم جنین گاوی 15 درصد، تشکیل شدند. روش های انجمادی 1 و 2 به ترتیب در دمای 4- درجه سانتیگراد و دمای اتاق انجام شدند. مراحل ذوب در گروه انجمادی 1 با استفاده از محیط پایه α-MEM، سرم جنین گاوی 20 درصد و سوکروز 1 مولار و در گروه انجمادی 2 با بهره برداری از محیط پایه α-MEM، سرم جنین گاوی 15 درصد و غلظت های کاهشی سوکروز (1، 5/0 و 25/0 مولار) انجام گردید. بافت های تخمدانی غیر انجمادی و منجمد و ذوب شده، در محلولهای مرکب از محیط پایه α-MEM و رنگ تریپان بلو 4/0 درصد به مدت 20 دقیقه انکوبه شدند. بافت های تخمدانی پس از رنگ آمیزی در محلول بوئن فیکس شده و برشهای بافتی بعد از رنگ آمیزی با هماتوکسیلین و ائوزین با استفاده از میکروسکوپ نوری به صورت سریالی شمارش شدند.
درصد زیادی از فولیکولهای بدوی در گروه کنترل غیر انجمادی مشاهده شدند و یک اختلاف معنی داری (05/0>P) بین گروه کنترل غیر انجمادی و انجمادی 1و همچنین بین گروه های انجمادی 1 و انجمادی 2 مشاهده شد. اختلافات بین فولیکولهای اولیه و پره آنترال در گروه های گروه های مورد مطالعه معنی دار نبودند. شاخص زنده مانی هم کاهش معنی داری را در هر دو گروه انجمادی نسبت به گروه کنترل غیر انجمادی نشان داد و از طرفی، افزایش شاخص زنده مانی به صورت معنی داری (05/0>P) درهر سه دسته فولیکولی در گروه انجمادی 2 نسبت به گروه انجمادی 1 مشاهده شد.
انجماد به روش 2 گزینه مناسبتری برای حفظ و نگهداری بافت تخمدانی است و همچنین روش رنگ آمیزی تریپان بلو، بعنوان یک شیوه سریع و آسان برای ارزیابی بافت تخمدانی پیشنهاد می شود.