نقش اسیدهای آمینه هیستیدین 16، تیروزین 82 و تریپتوفان 86 در شیفت نوری، فعالیت و پایداری حرارتی فوتوپروتئین اکورین

اکورین فوتوپروتئینی حساس به کلسیم است که از آپوآکورین (189 اسید آمینه)، اکسیژن و کوالنترازین (کروموفور ایمیدازوپیرازین) تشکیل شده است. عملکرد این پروتئین نوری در حضور کلسیم، نشر نور آبی (469 نانومتر) است. مطالعات نشان داده است که سه اسید آمینه H16، Y82 و W86 در عملکرد و شیفت نوری پروتئین اکورین نقش دارد. در تحقیق حاضر به منظور بررسی ارتباط ساختار- عملکرد پروتئین از جهش های ترکیبی استفاده شد تا نقش و اهمیت جایگاه های مورد نظر، در حالت تک و ترکیبی، به دست آید.
با استفاده از روش جهش های هدفمند، جهش های تکی و ترکیبی در پلاسمید مورد نظر انجام گرفت و فوتوپروتئین اکورین در حالات تک جهشی و جهش های ترکیبی، به دست آمد. در مرحله بعد پایداری حرارتی و فعالیت نوری پروتئین های به دست آمده با استفاده از لومینومتر، اندازه گیری و شیفت نوری آن ها با استفاده از اسپکتروفلوریمتر، اندازه گیری شد.
نتایج حاصله نشان داد که نقش جایگاه W86 در شیفت نوری و نقش H16 در عملکرد از سایر موقعیت های دیگر بالاتر است. همچنین پایداری حرارتی جهش اعمال شده در موقعیت W86 نسبت به سایر جهش ها عملکرد بهتری را نشان می دهد.
این تحقیق نشان داد که جایگاه اسید آمینه W86 در شیفت نوری و پایداری حرارتی اکورین، از Y82 و H16 بالاتر است و می توان از این جهش جهت تولید پروتئین کاراتر در راستای حسگری و سایر کاربردهای مربوطه استفاده نمود.