همسانه سازی cDNA کد کننده انکسین آ1 انسانی در یک حامل بیانی یوکاریوتی

Annexin A1 یک پروتئین قابل تحریک با گلوکوکورتیکوئید ها است که بواسطه ممانعت از عملکرد آنزیم فسفولیپاز سیتوپلاسمی و ممانعت از تولید آراشیدونیک اسید و تبدیل آن به ایکوزانوئیک اسید ها عمل می کند. بنابراین، فعالیت آنزیمی iNOS و COX-2 را کاهش می دهد. لذا احتمالا این پروتئین در ممانعت از التهاب سلولی تاثیر دارد. بنابراین به منظور مطالعات بیشتر در مورد اثرات محافظتی ANX І در اختلالات عصبی تصمیم به ساخت توالی کد کننده (CDS) در یک وکتور مناسب در راستای بررسی اثرات افزایش بیان آن در شرایط التهاب عصب در یک سلول پیش ساز عصب گرفتیم. ابتدا RNA از خون یک داوطلب سالم جداسازی شد. سپس cDNA سنتز شد و RT-PCR با پرایمرهای اختصاصی برای ANX I انسانی انجام شد. در دومین مرحله قطعه تکثیر شده مجددا جهت انجام PCR با استفاده از پرایمر های اختصاصی بکار گرفته شد و جایگاه برش AgeI و توالی FLAG بترتیب در بالا و پائین دست ANX I CDS قرار داده شد. cDNA کد کننده ANX I-Flag به درون وکتور pTZ/T الحاق گردید. پلاسمید نوترکیب حاصل برای اطمینان از صحت انجام کلون ANX I CDS تعیین توالی گردید. در مرحله بعدی قطعه DNA کد کننده ANX I-Flag در PGL268 بعنوان یک وکتور اختصاصی یوکاریوتیک الحاق شد. PGL268 یک اپی زومال وکتور دارای توالی S/MAR جهت حفظ خصوصیت خارج کروموزومی وکتور است. نتایج نشان داد که cDNA کایمریک کد کننده ANX I-Flag بطور اختصاصی در یک وکتور بیانی جهت آزمایش بیشتر کاربردهای ANX I الحاق شد.