ساخت سازهpEGFP-ChEgTrp به عنوان مدل DNA واکسن چند اپیتوپی علیه اکینوکوکوس گرانولوزوس

آلودگی با لارو انگل اکینوکوکوس گرانولوزوس سبب بیماری هیداتیدوزیس در انسان و نشخوارکنندگان می شود. با توجه به شیوع بالای این آلودگی در ایران، مقابله با آن از لحاظ بهداشت جامعه اهمیت خاصی دارد.
مطالعه به منظور تولید و ساخت سازه pEGFP-ChEgTrp به عنوان مدل DNA واکسن چند اپیتوپی علیه انگل اکینوکوکوس گرانولوزوس انجام شد.
این مطالعه تجربی در سال 1392در موسسه تحقیقاتی واکسن و سرم سازی رازی کرج انجام شد. ابتدا اپیتوپ های تحریک کننده سیستم ایمنی میزبان با استفاده از پایگاه اطلاعاتی IEDB پیش بینی و توالی کد کننده آن ساخته شد. سپس این توالی با استفاده از واکنش PCR تکثیر شد. محصول PCR پس از هضم آنزیمی با آنزیم محدود کننده Xho I در وکتور pEGFP-N1 کلون شد و باکتری حاوی پلاسمید نوترکیب با روش های مختلف از قبیل PCR Colony، الکتروفورز آگارز ژل و توالی یابی بررسی گردید.
تعداد 4 پپتید حاوی 10 اپیتوپ خطی در آنتی ژن EgTrp پیش بینی شد. توالی نوکلئوتیدی کد کننده ChEgTrp با استفاده از پرایمرهای اختصاصی و با روش PCR تکثیر و قطعه ای شامل 270 جفت باز حاصل شد. قطعه مورد نظر وارد وکتور pEGFP-N1 گردید و پلاسمید نوترکیب با روش Colony PCR و الکتروفورز آگارز ژل تایید شد. برای تایید نهایی، پلاسمید نوترکیب توالی یابی و به این ترتیب سازه ژنتیکی pEGFP-ChEgTrp ساخته شد. قطعه ChEgTrp به طور موفقیت آمیزی در وکتور pEGFP-N1 کلون شد و این پلاسمید می تواند جهت ساخت DNA واکسن استفاده شود.