ساخت ناقل لنتی ویروسی بر پایه ویروس HIV-1 با کاربری انتقال ژن به سلول های تقسیم شونده و غیر تقسیم شونده

روش های زیستی انتقال ژن یا استفاده از ناقل های ویروسی، کاربرد گسترده ای در اهداف درمانی دارد. استفاده از ناقل های لنتی ویروسی با داشتن مزایایی چون توانایی آلوده سازی سلول های تقسیم شونده و غیر تقسیم شونده، توان حمل قطعه ی ژنی بزرگ و بیان پایدار ژن خارجی، ابزاری مناسب برای انتقال ژن در کاربردهای تحقیقاتی و درمانی به شمار می آیند. هدف از این پژوهش تولید یک ناقل لنتی ویروسی بر مبنای HIV-1(Human Immunodeficiency virus) با پوششی از ویروس وزیکولار استوماتیس(vesicular stomatitis virus glycoprotein-G: VSVG) بود. این ناقل می تواند به عنوان وسیله ای برای انتقال ژن به سلول های تقسیم شونده و غیر تقسیم شونده، در انواع مطالعات تحقیقاتی و درمانی، مورد استفاده قرار بگیرد.
روش کلسیم فسفات برای ترنسفکشن همزمان سه پلاسمید شامل پلاسمید بیان کننده ژن خارجی به همراه گزارشگر بیانی(pWPXL-GFP)، پلاسمید بیان کننده پروتئین های gag و pol(psPAX2) و پلاسمید بیان کننده گلیکوپروتئین پوشش(pMD2.G)، بر روی رده سلولی کلیه جنین انسان، انجام گرفت. تایید ترانسفکشن با استفاده از فلوسیتومتری انجام گرفت و پس از تغلیظ ویروس ها، ترانسداکشن بر رده سلولی هدف انجام شد.
نتایج فلوسیتومتری بیان 37/ 51 درصد از ژن گزارشگر پروتئین سبز فلورسانت(Green Fluorescent Protein:GFP) را در سلول های ترانسفکت شده نشان داد. پس از تغلیظ ویروس و انجام ترانسداکشن؛ دخول پروویروس به ژنوم سلول هدف و بیان طولانی مدت GFP در این سلول ها با مشاهده به وسیله میکروسکوپ فلورسانت، 15روز پس از ترانسداکشن ارزیابی شد و نتایج مثبت گزارش شد.
بیان ژن گزارشگر در سلول ها،پس از ترانسداکشن، صحت ورود ناقل ویروسی را به سلول ها نشان داد و به این ترتیب ناقل تولید شده در این پژوهش علاوه بر کارایی انتقال ژن به دلیل ماهیت لنتی ویروسی آن، توانایی انتقال ژن به سلولهای غیر تقسیم شونده را نیز علاوه بر سلول های تقسیم شونده دارا می باشدکه موجب کاربرد گستره تر آن، نسبت به سایر ناقل های ویروسی، در مطالعات انتقال ژن میشود.