همسانه سازی و بیان ژن زیرواحد اتصالی سم شبه شیگا نوع 2 و بررسی ایمنی زایی آن در مدل حیوانی

اشرشیا کلی انتروهموراژیک (EHEC) با قدرت تولید سم شبه شیگا نوع 2 (Stx2) عامل اصلی اسهال خونی باکتریایی است. این پاتوژن در برخی موارد می تواند منجر به سندرم اورمی همولیتیک (HUS) و نارسایی کلیوی با درجه مرگ ومیر بالا شود. تولید Stx2 اصلی ترین عامل بیماری زائی سویه های EHEC است و ازاین رو خنثی سازی سم با آنتی بادی های سرمی اختصاصی به عنوان راهکار اصلی در روش های پیشگیری و درمان ضد HUS مطرح است. در این تحقیق، همسانه سازی، بیان پروتئین نوترکیب، خالص سازی و ایمنی زایی زیرواحد B سم Stx2 (Stx2B) که عامل اتصال سم به سلول های هدف است را شرح داده شده است.
ژن stx2B با استفاده از PCR تکثیر و در ناقل بیانی pET28a همسانه سازی و ناقل بیانی به E. coli BL21-DE3 منتقل شد. پروتئین نوترکیب rSTX2B پس از ارزیابی بیان با استفاده از ستون نیکل خالص سازی شد. پروتئین rSTX2B تخلیص شده به عنوان کاندید ایمنی زایی به روش زیرپوستی در سه مرحله به موش های نژاد Balb/c تزریق شد. تولید آنتی بادی سرمی ضد rSTX2B در خون موش های ایمن شده با استفاده از آزمون الیزا مورد ارزیابی قرار گرفت. خنثی سازی سم در شرایط in vitro بر روی سلول های Hela و در شرایط in vivo با آزمون چالش موش های ایمن با سم Stx2 بررسی شد.
با بررسی میزان IgG القا پاسخ ایمنی عمومی در موش های ایمن شده تائید شد. نتایج آزمون سلول های Hela نشان داد که سرم موش های ایمن قادر به خنثی سازی سم است. در آزمون چالش حدود 70 درصد از موش های ایمن زنده ماندند.
نتایج نشان داد که پروتئین نوترکیب rSTX2B می تواند منجر به القا پاسخ ایمنی خنثی کننده در موش گردد و می تواند به عنوان یکی از اجزا اصلی واکسن علیه EHEC به کار برده شود.