طراحی و ساخت وکتور نوترکیب واجد ژن Vpr ویروس نقص ایمنی اکتسابی انسانی (HIV) با استفاده از وکتور EGFP-N1

در این پروژه، هدف کلی تحقیق طراحی و ساخت وکتور نوترکیب واجد ژن تمام طول Vpr ویروس نقص ایمنی اکتسابی انسانی (HIV-1) با استفاده از وکتور pEGFP-N1 بود. کلونینگ ژن Vpr قبلا درون وکتور pEGFP_N1 صورت نگرفته بود.
وکتور pUC19 دارای ژن تمام طول Vpr جهت تایید با استفاده از آنزیم های محدود کننده برش داده شد. سپس جهت اضافه کردن سایت های برش آنزیمی (XhoI، KpnI) در ژن مورد نظر مطابق با سایت های موجود در وکتور pEGFP-N1 با طراحی پرایمر واکنش PCR بر روی ژن Vpr با استفاده از پلاسمید نوترکیب pUC19-Vpr به عنوان الگو انجام گرفت. محصول پس از الکتروفورز، مورد استخراج از ژل قرار گرفته و تخلیص گردید. سپس هر دو محصول PCR و وکتور pEGFP-N1 تحت واکنش هضم آنزیمی قرار گرفتند. در مرحله بعد، واکنش الحاق توسط آنزیم T4 انجام گرفت و این ژن به درون وکتور pEGFP-N1 کلون شده و به درون باکتری DH5a ترنسفورم گردید. در نهایت سازه استخراج شده و با هضم آنزیمی و PCR مورد تایید قرار گرفت.
در این پروژه ابتدا ژنVpr درون وکتور pUC19 پس از برش آنزیمی مورد تایید قرار گرفت. سپس این ژن به طور تمام طول و با قرار دادن توالی های برش از 2 آنزیم محدودالاثر در طراحی پرایمرهای اختصاصی در واکنش PCR تکثیر داده شد و اندازه محصول در الکتروفورز مورد تایید قرار گرفت. محصول واکنش الحاق ژن Vpr به طور تمام طول در وکتور pEGFP-N1 نیز هم در هضم آنزیمی و هم در PCR مورد تایید قرار گرفت.
استنتاج: ساخت وکتور نوترکیب واجد ژن تمام طول Vpr ویروس نقص ایمنی اکتسابی انسانی با استفاده از وکتور pEGFP-N1 با موفقیت انجام گرفت.