بیان و خالص سازی پروتئین کایمر نوترکیب (3M2e-HA2) واجد نواحی حفاظت شده هماگلوتینین و پروتئین ماتریکس ویروس آنفلوانزا در راستای تولید واکسن زیرواحدی جهانی

ویروس آنفلوانزا یکی از مهم ترین عوامل عفونی در سراسر جهان است که تغییرات آنتی ژنیک آن چالش بزرگی در مسیر تولید واکسن می باشد. در حال حاضر اکثر پژوهش ها بر روی توسعه واکسن های زیرواحدی حاصل از پپتیدهای آنتی ژنیک حفاظت شده ویروس متمرکز شده است. زیر واحد کوچک مولکول هماگلوتینین (HA2) و بخش آمینی خارج سلولی پروتئین کانال یونی (M2e) با 23 اسید آمینه، در همه ویروس های آنفلوانزای A انسانی بسیار حفاظت شده هستند و هدف مناسبی برای تولید واکسن آنفلوانزای وسیع الطیف می باشند.
در این پژوهش، قطعه ژنی 3M2e سنتتیک، بالا دست ژن HA2 در سازه pET28a-HA2 پس از هضم آنزیمی با آنزیم BamH1، کلون شد. سازه واجد کایمر 3M2e-HA2 به باکتری E.coli سویه BL21 منتقل شد و سلول ها در محیط مایع LB حاوی کانامایسین (50mg/ml) بعد از القا با ایزوپروپیل بتا دی تیو گالاکتوزید (IPTG) به صورت کشت شبانه رشد داده شد. بررسی و تایید بیان سازه 3M2e-HA2 به وسیله الکتروفورز روی ژل پلی آکریل آمید PAGE SDS- و وسترن بلات با استفاده از آنتی بادی های مونوکلونال اختصاصی انجام شد و سپس پروتئین نوترکیب توسط ستون Ni-TED تخلیص گردید.
نتایج کلونی PCR و هضم آنزیمی و تعیین توالی نشان داد که ژن 3M2e در وکتور pET28a-HA2 به طور صحیح و در قاب خواندنی دنبال هیستیدینی کلون شده است.
استنتاج: شناسایی آنتی بادی علیه اپی توپ های حفاظت شده HA2 و M2e، گامی مهم به سوی ساخت واکسن جهانی ویروس آنفلوانزا است، بنابراین سازه (3M2e-HA2)تهیه شده در این مطالعه می تواند کاندید واکسن زیر واحدی مناسبی برای پیشگیری از این عفونت باشد.