همسانه سازی و ساخت وکتور بیانی ژن گلوتامات دکربوکسیلاز باکتری لاکتوباسیلوس پلانتاروم

گاما آمینو بوتیریک اسید (گابا) یک اسیدآمینه چهار کربنه غیر پروتئینی است که در درمان فشارخون، دیابت، التهاب و افسردگی می تواند بکار رود. گابا توسط آنزیم گلوتامیک اسید دکربوکسیلاز در بسیاری از موجودات شامل باکتری ها سنتز می شود. از اینرو همسانه سازی این آنزیم جهت بهینه سازی تولید گابا اهمیت دارد. هدف از این پژوهش همسانه سازی و ساخت وکتور بیانی حاوی ژن گلوتامات دکربوکسیلاز از باکتری لاکتوباسیلوس پلانتاروم PTC1058 است.
در یک مطالعه تجربی خصوصیات مورفولوژیک، بیوشیمیایی، ژنتیکی و توالی یابی 16s rDNA سویه لاکتوباسیلوس پلانتاروم1058 بررسی شد. سپس DNA ژنومیک این باکتری جدا و با استفاده از PCR ژن گلوتامات دکربوکسیلاز تکثر شد. سپس این ژن در حامل کلونینگ pJET1.2/Blunt وارد و در حامل pET32a ساب کلون گردید. حامل پلاسمید بیانی pET32a-gad در اشریشیاکلی سویه BL21 ترانسفورم گردید و بیان پروتئین با استفاده از SDS-PAGE بررسی شد.
یافته های به دست آمده از بررسی های مورفولوژیک، بیوشیمیایی و ژنتیکی توالی یابی 16s rDNAنشان داد که زیر سویه ی مورد بررسی مربوط به سویه لاکتوباسیلوس پلانتاروم است. نتیجه ی توالی یابی قطعه ی تکثیرشده با استفاده از PCR وجود ژن گلوتامات دکربوکسیلاز را نشان داد. در پایان نتیجه کلنیPCR و آنالیز SDS-PAGE، صحت همسانه سازی و بیان آنزیم در سویه ی نوترکیب BL21را تایید کرد.
این مطالعه همسانه سازی موفق ژن گلوتامات دکربوکسیلاز از لاکتوباسیلوس پلانتاروم1058 را نشان داد. ژن همسانه سازی شده می تواند در سیستم های پروکاریوتی و یوکاریوتی سریع رشد و استفاده از محیط کشت های ارزان تر و حتی پسماند های غیرقابل بازیافت به کاربرد.