کلونینگ، بیان و تخلیص فیتاز تغییریافته اشرشیاکلی

فیتاز ها گروهی از فسفاتازها هستند که قادر به هیدرولیز فیتیک اسید می باشند. فیتازها با تجزیه ی فیتات قادر به کاهش یا حذف اثرات مخرب فیتات هستند. فیتاز اسیدی و مقاوم دمایی همراه با تولید بالا و خالص و البته یک سیستم نسبتا ارزان دارای کاربرد در مقیاس وسیع می باشد. لذا در این مطالعه با تغییراتی در توالی آنزیم، تولید فیتاز نوترکیب با طول کم تر و میزان بیان بیش تر مورد بررسی قرار گرفت.
توالی ژن فیتاز از پایگاه NCBI گرفته شد. پس از مطالعات بیوانفورماتیکی و اعمال تغییرات مورد نظر به منظور افزایش بیان پروتئین، تکثیر ژن با استفاده از PCR انجام شد. از سویه E.coli BL21 (DE3) برای بیان پروتئین استفاده شد. تخلیص پروتئین با کیت Ni-NTA انجام شد و نهایتا فعالیت آنزیم مورد ارزیابی قرار گرفت.
فیتاز با موفقیت بیان و تخلیص گردید. سنجش فعالیت آنزیم نشان دهنده ی فعالیت قابل توجهی بود.
فیتاز نوترکیب تولید شده علی رغم حذف بخش هایی از آنزیم فعالیت بالایی داشت.