بررسی امکان انتقال cDNA ژن منگنز پراکسیداز (mnp) از قارچ صدفی به قارچ دکمه ای سفید با کمک آگروباکتریوم

قارچ دکمه ای سفید یکی از مهم ترین محصولات باغبانی در دنیا به شمار می رود که در برداشت سوم محصول قابل قبولی تولید نمی کند. دلیل این امر کاهش مواد غذایی و ناتوانی این قارچ در استفاده بهینه از کمپوست ذکر شده است. تغییر بیان یا نوع آنزیم های موثر در تجزیه ترکیبات لیگنینی نظیر منگنزپراکسیداز راه حل های احتمالی حل این مشکل می باشند، که به نظر می رسد بتوان با بهره گیری از روش انتقال ژن از طریق آگروباکتریوم به این هدف دست یافت. در این پژوهش از قارچ خوراکی صدفی واریته فلوریدا به عنوان منبع ژن منگنزپراکسیداز و بافت های تیغه و کلاهک قارچ دکمه ای سفید نژاد 737 به عنوان گیرنده ژن استفاده شدند. باکتری آگروباکتریوم سویه ی LBA4404 دارای پلاسمید p13H88-FM نیز به عنوان ناقل به کار رفت. محیط کشت گزینشگر حاوی 30 میکروگرم بر میلی لیتر آنتی بیوتیک هیگرومایسین برای انتخاب ریزنمونه های تراریخت مورد استفاده قرار گرفت. ریزنمونه های تیغه که نرخ تراریزش آن ها پنج درصد بود، بهتر از ریزنمونه های کلاهک که نرخ تراریزش آن ها صفر درصد بود، به روش تراریزش مورد استفاده پاسخ دادند. علاوه بر توانایی رشد بر روی محیط کشت انتخابی، واکنش زنجیره ای پلیمراز با آغازگرهای اختصاصی ژن های hph و mnp به عنوان یکی از روش های تایید تراریختگی، سبب تکثیر قطعات به ترتیب 1049 و 1086 نوکلئوتیدی شد و تراریختگی کلنی های قارچی را تایید کرد.