روش اصلاح شده PCR-RFLP برای تشخیص جهش JAK2 V617F در بیماران مبتلا به نئوپلاسم های میلوپرولیفراتیو

سابقه و هدف نئوپلاسم های میلوپرولیفراتیو، از جمله بدخیمی های خونی هستند که علایم بالینی بسیار متغیری دارند. تقسیم بندی بیماران میلوپرولیفراتیو به دو گروه دارای کروموزوم فیلادلفیا(Ph+) و فاقد آن(Ph-) می باشد. در گروه Ph- ، بیماری های پلی سایتمی ورا، ترومبوسایتمی اساسی، میلوفیبروز اولیه و دیگر بیماری های نادر قرار می گیرد. این گروه از بیماران دارای جهش JAK2 V617F می باشند که با درصدهای مختلف دیده می شود. هدف از این مطالعه، اجرای روش اصلاح شده PCR-RFLP برای تشخیص جهشJAK2 V617F در بیماران مبتلا به نئوپلاسم های میلوپرولیفراتیو بود.
مواد و روش هادر این مطالعه مقطعی، 47 بیمار با درخواست آزمایش JAK2 V617F ، مورد بررسی قرار گرفتند. برای تمامی نمونه ها آزمایش تشخیصی JAK2 V617F با استفاده از روش استاندارد ARMS TaqMan Probe انجام شد. جهت تایید نهایی، برخی از نمونه ها مورد توالی یابی ژنی قرار گرفتند. برای شناسایی ناحیه جهش با استفاده از روش PCR-RFLP ، آغازگر های اختصاصی و آنزیم BsaXI استفاده شد. با توجه به این که در این مطالعه نمونه های منفی و مثبت به همراه یک روش استاندارد برای تعیین جهش وجود داشت، محاسبه حساسیت و ویژگی این روش 100% تعیین گردید. تحلیل نتایج توسط آزمون t انجام شد.
یافته هانتایج PCR-RFLP جهش JAK2 V617F برای تمامی نمونه ها کاملا مشابه و منطبق با نتایج روش های استانداردARMS TaqMan Probe و تعیین توالی بود.
نتیجه گیریروش PCR-RFLP دارای حساسیت تشخیصی قابل مقایسه ای با روش های Real Time PCR و تعیین توالی بود. مزیت این روش اصلاح شده، توانایی آن در افتراق انواع هموزیگوت و هتروزیگوت بیماران، وجود کنترل داخلی برای عملکرد آنزیم و هم چنین سهولت و صرفه اقتصادی آن است.