زیرهمسانه سازی و بیان ژن ممزوجی M L1-stxB دارواش در E. Coli و تولید آنتی بادی آن در موش سوری

  عصاره برگ های دارواش (Viscum album L) دارای پروتئین MLI از نوع RIP2 (پروتئین های غیرفعال ریبوزومی تیپ 2) با خواص لکتینی هستند. STxB شیگا توکسین به عنوان یک ایمونواجوانت و حامل، مطرح بوده و به گیرنده سطح سلولی خود به نام Gb3 متصل می گردد که روی اکثر سلول های بدن بیان می شود. در این مطالعه، بیان آنتی ژنML1-stxB در E. coli و تولید آنتی بادی آن در موش سوری بررسی گردید. در این مطالعه تجربی، پلاسمید pUC57 حاوی ژن MLI با جایگاه های آنزیمی NdeI و SalI در وکتور بیانی pET28a(+)-stxB، زیرهمسانه سازی شد و به باکتری E. coli سویه BL21(DE3) تراریخت (ترانسفورم) گردید. بیان کاست ژنی MLI-StxB تحت القایIPTG انجام گرفت. پس از تخلیص، پروتئین نوترکیب MLI-STxB به وسیله ستون نیکل کروماتوگرافی در چهار نوبت متوالی به موش های سوری تزریق شد. در این مطالعه، ژن ML1-stxB کلون شده در وکتور بیانی pET28a(+)، با واکنش PCR و آنالیز آنزیمی تایید گردید. همچنین پروتئین نوترکیب تولیدشده به وسیله SDS-PAGE و لکه گذاری وسترن مورد تایید قرار گرفت، سپس آنتی بادی تولیدشده از سرم موش جداسازی و با روش تست ELISA بررسی گردید. براساس نتایج این مطالعه، پروتئین ML1 دارای خاصیت غیرفعال کننده ریبوزومی و STxB نقش یاوری و حاملی دارد؛ لذا این پروتئین نوترکیب، کاندیدای واکسن علیه سم دارواش شیگلا دیسانتری بوده که از آنتی بادی آن می توان به عنوان شناساگر استفاده کرد.