بیان پروتئین نوترکیب حاوی CfaB، ST، CfaE و LtB از باکتری اشریشیا کلی انتروتوکسیژنیک و بارگذاری آن در نانوذرات کیتوسان

اشریشیا کلی انتروتوکسیژنیک (ETEC)، مهم ترین عامل باکتریایی مولد اسهال مسافرتی است. این باکتری دارای عوامل متعدد بیماریزا از جمله عوامل کلونیزاسیون (CFs)، توکسین حساس به حرارت (LT) و توکسین پایدار به حرارت (ST) است. طراحی و تولید واکسن علیه این بیماری به دلیل افزایش مقاومت آنتی بیوتیکی و کاهش منابع آب سالم، از اهداف سازمان بهداشت جهانی است. یک واکسن زیرواحدی موثر علیه ETEC، می تواند شامل توکسوئیدی از هر دو سم و نیز عوامل کلونیزه کننده شایع باشد. هدف مطالعه حاضر بیان، تخلیص و کپسوله کردن پروتئین نوترکیب در نانوذرات کیتوسان بود.

مواد و روش ها:

در مطالعه تجربی حاضر از باکتری E. coli BL21DE3 دارای ناقل pET-28a استفاده شد. این ناقل دارای ژن نوترکیب کایمر cscl شامل cfab به همراه سم st، cfae و ltb است. پس از القای بیان ژن و تخلیص پروتئین نوترکیب با ستون Ni-NTA، وسترن بلاتینگ به منظور تایید انجام شد. سپس پروتئین CSCl در نانوذرات کیتوسان کپسوله و اندازه آن توسط دستگاه پارتیکل سایز آنالایزر اندازه گیری شد.

یافته ها:

پروتئین نوترکیب CSCL توسط ستون Ni-NTA به روش دناتوره (اوره) تخلیص شد. سپس این پروتئین تخلیص شده (~57کیلودالتون) توسط وسترن بلاتینگ تایید و اندازه نانوذرات حاوی این پروتئین 0/112نانومتر با بازده بارگذاری 98/8% تخمین زده شد.

نتیجه گیری:

پروتئین نوترکیب کایمر با مزایایی از جمله داشتن آنتی ژن های سطحی و مهم ETEC و کپسوله شدن در نانوذرات کیتوسان، می ‎تواند به عنوان کاندیدی مناسب برای ساخت یک نانوواکسن خوراکی به منظور ایجاد هر دو پاسخ ایمنی مخاطی و سیستمیک، مورد توجه قرار گیرد.