روش های کلاسیک و آغازگرهای اختصاصی در ردیابی قارچ های اندوفیت در برخی گرامینه های علفی

این تحقیق به منظور بررسی روش های کلاسیک و آغازگرهای اختصاصی در ردیابی قارچهای اندوفیت در گیاهان علفی تیره گندمیان صورت گرفت که در راستای این هدف، 20 جدایه قارچ از چهار میزبان مرتعی Bromus tomentellus، Lolium prenne، Festuca pratensis و Festuca arundinacea جداسازی گردید. نمونه ها ابتدا از طریق رنگ آمیزی با محلول رنگی رز بنگال از نظر حضور قارچ اندوفیت آزمایش شدند، سپس نمونه های حاوی قارچ روی محیطهای کشت متفاوت کشت شدند. با توجه به تفسیر دندروگرام قارچ های اندوفیت در هر میزبان مشابه بودند. قارچ های جدا شده از F. pratensis با F. arundinacea در یک گروه قرار گرفتند که این امر نشان دهنده شباهت بیشتری بین این قارچها است DNA. قارچهای اندوفیت پس از استخراج با استفاده از یک گروه آغازگر عمومی ITSI، ITS4 و دو گروه آغازگر اختصاصی IS1، IS3 و2-1،1-11طی واکنش زنجیره ای پلیمر از تکثیر شده و حضور قارچهای اندوفیت جنس Neotyphodium در آنان مورد بررسی قرار گرفت. تمام نمونه ها با آغازگرهای ITS1، ITS4 ایجاد باندی بین 750 - 550 جفت بازی نمودند که این باند براساس منابع موجود نشانه وجود قارچ اندوفیت است. آغازگرهای 2-1،1?-11 با برخی نمونه ها ایجاد باند 1000 جفت بازی نمودند که این باند مختص جنس Neotyphodium است. به منظور بالابردن دقت کار، از آغازگرهای IS1، IS3 که با قارچهای اندوفیت جنس Neotyphodium ایجاد باند 444 جفت بازی می نماید، استفاده گردید. از میان 20 جدایه مورد آزمایش، 18 جدایه تولید باند 444 جفت بازی که مختص جدایه جنسNeotyphodium بود را تولید نمودند. دو جدایه با نامهای FpGon و FaSm که با آغازگرهای ITS1، ITS4 ایجاد باند750-550 جفت بازی نموده بودند، با آغازگرهای IS1، IS3 باند 444 جفت بازی را تولید نکردند. به احتمال زیاد این جدایه ها قارچهای اندوفیتی به جز گونه های Neotyphodium می باشند.