واکسیناسیون موشهای BALB /c علیه لیشمانیوز پوستی با استفاده از لیپوزومهای حاوی کلیکو پروتئین سطحی لیشمانیا نو ترکیب (rgp63)

هدف این مطالعه تهیه فرآورده های لیپوزومی حاوی rgp63و (major surface glycoprotein of Leishmania recombinant) است که بتواند در موش های BALB/c به صورت اختصاصی باعث القای ایمنی سلولی شود و موش ها را در مقابل چالش با انگل زنده لیشمانیا ماژور، محافظت کند. لیپوزوم های حاوی rgp63 به روش دهیدراسیون - رهیدراسیون (Dehydration-Rehydration vesicles, DRVs) تهیه شدند. اجزای اصلی لیپیدی تشکیل دهنده لیپوزوم ها شامل Dipalmitoylphosphatidylcholin (DPPC) و کلسترول (Chol) DRV-DPPC/Chol-rgp63 با نسبت مولی 2:7) بود و اجزای دیگر شامل (Dioleoylphosphatidylethanolamine) وDOPE DRV-DPPC/DOPE/Chol-rgp63 با نسبت مولی (2:1:7 و استئاریل آمین - (SA) DRV-DPPC/SA/Chol-rgp63 با نسبت مولی 2:2:7) به فرمولاسیون اصلی اضافه شدند تا لیپوزوم های به ترتیب فوزوژنیک و با بار مثبت حاصل شوند. فرمولاسیون دیگری حاوی تمام اجزای لیپیدی فوق بود (لیپوزوم با بار مثبت و فوزوژنیک DRV-(DPPC/DOPE/SA/Chol-rgp63) با نسبت مولی 2:2:1:7).لیپوزوم های حاصل محدوده سایز ناهمگن (μm 1.5-0.1) داشتند ولی میزان محصور سازی آنها بالا (52-(% 46 بود. فرآورده های لیپوزومی حاوی rgp63 μm (2μg)و rgp63 به تنهایی (2μg) PBS-rgp63 وPBS و لیپوزوم خالی (DRV-DPPC/Chol) به عنوان کنترل به صورت زیر جلدی به موش های BALB/c در گروه های 10 تایی سه مرتبه به فاصله 3 هفته از هم تزریق شدند. سه هفته بعد از آخرین تزریق ایمن سازنده تست ازدیاد حساسیت تاخیری (Delayed type hypersensitivity, DTH) با تزریق 2 میکروگرم از rgp63 در کف پای چپ موش و(Phosphate buffer saline) PBS به عنوان کنترل در کف پای راست به صورت زیرجلدی انجام گرفت و میزان تورم حاصل در پای موش ها 24، 48 و 72 ساعت پس از تزریق اندازه گیری شد. یک هفته بعد از تست DTH موش ها با تزریق پروماستیگوت های زنده لیشمانیا ماژور (2μg 50/10 6×1) در کف پای چپ به صورت زیرجلدی تحت چالش قرار گرفتند. میزان تورم و زخم در پای موش ها به صورت هفتگی به مدت 10 هفته اندازه گیری شد. آنالیز نتایج DTH نشان داد که در بین گروه های مختلف فرآورده لیپوزومی DRV- DPPC/DOPE/Chol-grp63 در مقایسه با گروه های کنترل بیشترین تاثیر را در ایجاد پاسخ DTH مثبت در هر سه نوبت اندازه گیری شده را دارد (P<0.01)، پاسخ فرآورده های لیپوزومی دیگر حاوی rgp63 و PBS rgp63 نیز در هر سه نوبت مثبت ولی کمتر بود(P<0.05). در تست چالش با انگل زنده گروه DRV-DPPC/DOPE/Chol-rgp63 اثر محافظتی کامل داشت(P<0.001). گروه DRV-DPPC/SA/Chol-rgp63 اثر محافظتی خوبی داشت ولی کمتر از گروه قبل بود.ولی فرآورده لیپوزومی DRV-DPPC/SA/Chol-rgp63 اثر محافظتی جزئی نشان داد که از نظر آماری بارز نبود (P>0.05). گروه های DRV-DPPC/DOPE/SA/Chol-rgp63 و PBS-rgp63 فقط به صورت نسبی (P<0.05) باعث محافظت موش ها شدند. این نتایج نشان می دهد که لیپوزوم های DRV-DPPC/DOPE/Chol-rgp63 می توانند ایمونوادجوانتهای مناسب برای rgp63 برای تحریک ایمنی سلولی و محافظت موش ها در قابل لیشمانیوز پوستی باشند.