تشخیص آلل های HLA-DR با روش PCR-SSP و مقایسه نتایج روش سرولوژیک با آن

مقایسه نتایج بدست آمده در روش سرولوژیک جهت تشخیص آلل های HLA-DR با نتایج روش جدید PCR-SSP تعداد 55 نمونه خون محیطی به طور تصادفی از مراجعین به آزمایشگاه پیوند اعضاء در اصفهان گرفته شد و تشخیص آلل های HLA-DR با هر دو روش مولکولی و سرولوژی صورت گرفت. روش سرولوژی با استفاده از 30 نوع آنتی سرم مختلف جهت تشخیص آلل های HLA-DR انجام شد و برای روش PCR-SSP پرایمرهای اختصاصی برای آلل های HLA-DRB1*01-10 (به غیر از (DR6, 8, 10 و نیزHLA-DR52 و DR53 مورد استفاده قرار گرفت. پس از استخراج DNA با استفاده از سیزده جفت پرایمر اختصاصی برای هر نمونه و به طور جداگانه واکنش PCR انجام گردید. در این تحقیق کنترل مثبت داخلی قطعه ای از توالی سومین اینترون لوکوس DR بود. پس از انجام PCR محصولات واکنش بر روی ژل آگارز 2 درصد الکتروفورز شده و در نهایت عکسبرداری از ژل، تفسیر و مقایسه نتایج صورت گرفت. نتایج 31 نمونه (3/56 درصد) کاملا مطابق روش سرولوژی بود. 12 مورد (22 درصد) در سرولوژیک هتروزیگوت و در مولکولی هموزیگوت تشخیص داده شدند. 7 مورد (7/12 درصد) در هر دو روش هتروزیگوت بودند اما در یک آلل اختلاف داشتند. 2 مورد (6/3 درصد) در روش سرولوژیک هموزیگوت و در مولکولی هتروزیگوت بودند و نیز یک مورد (8/1 درصد) در هر دو روش هموزیگوت بود اما بدین صورت که در سرولوژی HLA-DR14 و در مولکولی HLA-DR11 مشخص شد و نهایتا 2 مورد از 55 نمونه (6/3 درصد) در روش سرولوژیک قابل تشخیص نبودند. در نهایت تجزیه و تحلیل داده ها با استفاده از نرم افزار آماری SPSS و به کمک آزمونهای غیرپارامتریک (تست (Mc Nemar انجام شد.
نتایج بدست آمده از روش سرولوژیک معمول به میزان 7/43 درصد با نتایج روش PCR-SSP اختلاف داشت و این بیانگر خطای زیاد روش سرولوژی و یا به عبارت دیگر صحت بیشتر روش PCR-SSP برای DR-Typing می باشد.