روشی ساده و سریع برای عصاره گیری دی.ان.ا و تجزیه و تحلیل ریزماهواره ای در گیاهان درختی

در این مطالعه، روشی نو و بهینه ایجاد شد که در اینجا به صورت 6hDNA (به معنی یک ژنومیک دی.ان.ا به دست آمده از روش عصاره گیری در 6 ساعت) ذکر می شود و مبتنی است بر روش سنتی ستیل تری متیل آمونیوم برومید (CTAB). این روش، جدا سازی سریع و آسان ژنومیک دی.ان.ا را از بافت گیاهی ، به ویژه از بافت های دارای پلی فنل و پلی ساکارید زیاد، مقدور می کند. در این روش ، با افزودن غلظت های بالاتر از رسوبات انتخابی اسید نوکلئیک، CTAB 3% (w/v) ، و کلرید سدیم (M 42/1) از هم-رسوبی (co-precipitation) پلی ساکارید ها جلوگیری شد. برای خارج کردن پلی فنول ها به عنوان بازدارنده های PCR، پلی وینیل پیرولیدون 1% (w/v) (Polyvinylpyrrolidone) افزوده شد. با استفاده از کلروفرم: ایزوآمیل الکل (به نسبت 24:1) و فنل: کلروفرم: ایزومیل الکل (25:24:1) پروتئین ها تخریب شد و با سانتریفیوژ از عصاره گیاه خارج گردید. تولید کل دی.ان.ا از برگ های Vitis vinifera، Citrus sinensis ، وOlea europaea در محدوده 42 تا 980 نانوگرم در میکرو لیتر بود و نسبت A260/A280 بین 6/1 و 06/2 بود. خلوص و یکپارچگی دی.ان. ا به دست آمده اطمینان میدهد که کاربردهای بعدی(downstream applications) شامل PCR و مارکر های ریزماهواره ای موفق خواهد بود. استفاده از مواد گیاهی لیوفیلیزه (lyophilized) و کاهش زمان کل عملیات، این روش 6hDNA نو را در مقایسه با دیگر روش های جداسازی دی.ان.ا مانند روش های “Doyle and Doyle” ،“Lodhi” ، “Li” یا روش هایی که ازماده DNAzol و Plant Minikit Nucleospin استفاده میکنند ، راحت تر میکند.