جداسازی و تخلیص مجموعه آنتی ژنی 85 از مایکوباکتریوم بویس (BCG) و ارزیابی پرولیفراسیون سلولی علیه آن در محیط کشت سلولی خون تام (Whole Blood)

جداسازی وتخلیص مجموعه آنتی ژنی 85 از مایع کشت باکتری (Culture Filtrate) وبررسی پرولیفراسیون سلولی علیه آن در محیط کشت سلولی خون تام (WB- Whole Blood) افراد سالم با تست توبرکولین مثبت ومنفی مجموعه آنتی ژنی 85 پس از عبور مایع حاصل از کشت میکروبی مایکوباکتریوم بویس (BCG) از ستون های کروماتوگرافی فنیل سفاروز، DEAE - سفاسل و سوپردکس 75 خالص گردید. سپس جهت تائید خالص سازی وحضور آنتی ژن اختصاصی 85 از الکتروفورز پروتئین بر روی ژل پلی اکریل آمید وایمونوبلاتینگ استفاده گردید.در مرحله بعد با استفاده از روش کشت سلولی خون تام پرولیفراسیون سلولی (از طریق اندازه گیری میزان جذب تیمیدین رادیواکتیو) بر روی سلولهای حاصل از 25 نفر افراد سالم با تست توبرکولین مثبت و25 نفر افراد سالم با تست توبرکولین منفی علیه آنتی ژن 85، PPDو میتوژن محرک لنفوسیت های T (Phytohemagglutinin=PHA) مورد مطالعه قرار گرفت.
مجموعه آنتی ژنی 85 با وزن مولکولی 32-30 کیلو دالتون در الکتروفورز پروتئین بر روی ژل پلی اکریل آمید شناسائی شد. از سوی دیگر این پروتئین در ایمونوبلاتینگ یک واکنش قوی با آنتی مونوکلونال از خود نشان داد.پاسخ پرولیفراسیون سلولی به آنتی ژن 85 در افراد سالم با تست توبرکولین مثبت به طور معنی داری بیشتر از افراد سالم با تست توبرکولین منفی بود (P<0.001). همچنین88 درصد (25/22) افراد سالم با تست توبرکولین مثبت نسبت به این آنتی ژن پاسخ داده اند.
پاسخ پرولیفراسیون سلولی به مجموعه آنتی ژن 85 به طور معنی داری در افراد سالم با تست توبرکولین مثبت در مقایسه به افراد سالم با تست توبرکولین منفی متفاوت بوده که این موضوع می تواند نشانگر نقش حفاظتی این آنتی ژن علیه عفونت ناشی از مایکوباکتریوم توبرکلوزیس باشد.