زیر همسانه سازی و بیان آنتی ژن کایمر C-CFTX1-STxB زهر عروس دریایی و بررسی آنتی ژنیسیتی آن در موش سوری

گزش عروس دریایی جعبه ای دردناک بوده و می تواند مهلک باشد. زهر گونه C. fleckeri حاوی انواع پروتئین های فعال زیستی است. دو مورد از فراوان ترین پروتئین های موجود در این گونه، CfTX-1 و CfTX-2 است که با استفاده از روش الکتروفورز یا کروماتوگرافی به راحتی قابل جداسازی نمی باشند. فناوری بیان نوترکیب، جایگزینی مناسب برای جداسازی پروتئین طبیعی زهر می باشد. هدف از این مطالعه، بیان پروتئین C-CfTX1-STxB در E.coli و بررسی آنتی ژنیسیتی آن در موش سوری می باشد.

ژن کامل CfTX1 صناعی در پلاسمید pUC57 تهیه شد. قطعه CfTX-1 C- به وسیلهPCR  تکثیر و با جایگاه های آنزیمی BamHI وSalI  در وکتور بیانی pET28a-stxB زیر همسانه سازی و به باکتری E.coli ترانسفورم شد. بیان ژن تحت القایIPTG  انجام گردید. پس از تخلیص پروتئین و تزریق به موش سوری، میزان آنتی بادی تولید شده در سرم اندازه گیری شد. هم چنین موش ها به وسیله زهر عروس دریایی Rhopilema nomadica چالش شدند.

 در این مطالعه تجربی، ژن C-CfTX1-STxB، کلون شده در وکتور بیانی pET28a (+) به وسیله PCR، توالی یابی و با آنالیز آنزیمی تایید گردید. هم چنین پروتئین نوترکیب تولید شده به وسیله وسترن تایید شد. آنتی بادی تولید شده در سرم، توسط تست الایزا کمیت سنجی شد.

موش های ایمن شده در چالشی پس از 60 روز، 50 برابر LD50 زهر عروس دریایی را تحمل می نمایند. با توجه به عدم خاصیت کاردیوتوکسیستی و نوروتوکسیستی پروتئین نوترکیب، این پروتئین تولید شده می تواند به عنوان کاندید واکسن زهر عروس دریایی در موش سوری یا در مراحل بعدی کارآزمایی بالینی برای انسان پیشنهاد شود.