بکارگیری تکنیک نوین ترکیب PCR کمی با پروپیدیوم مونوآزید جهت شمارش استافیلوکوکوس اورئوس انتروتوکسیژنیک در محصولات خامه ای قنادی

استافیلوکوکوس اورئوس یکی از پاتوژن های مهم انسانی است که عامل بروز عفونت بوده و نیز با تولید انواع مختلف انتروتوکسین ها موجب مسمومیت های غذایی می گردد. استفاده از روش های معمول کشت جهت شمارش استافیلوکوکوس اورئوس دارای محدودیت هایی مانند مدت زمان طولانی برای رشد باکتری و فقدان حساسیت و دقت لازم در مورد سلول های زنده غیر قابل کشت می باشد.

هدف از انجام این پژوهش جستجو و شمارش استافیلوکوکوس اورئوس تولید کننده انتروتوکسین های A-E در محصولات خامه ای قنادی با استفاده از روش  PCR زمان واقعی در ترکیب با پروپیدیوم مونوآزید (PMA) جهت تفکیک سلول های زنده از مرده بود. 

روش کار:

 تعداد 100 نمونه شیرینی خامه ای به مدت 2 ماه و به صورت تصادفی از کارگاه های قنادی شهر آمل تهیه شد. پس از تهیه رقت از نمونه، پلت های باکتریایی جداسازی و قبل از استخراج DNA ، با PMA تیمار شدند. PCR زمان واقعی جهت شمارش کل سلول های استافیلوکوکوس اورئوس و نیز سویه های انتروتوکسیژنیک آن با استفاده از پرایمرهای اختصاصی انجام شد.

نتایج شمارش کشت معمولی به نتایج PMA-qPCR بسیار نزدیک بود (05/0<P)، لیکن داده های به دست آمده از qPCR که مجموع سلول های مرده و زنده را شمارش می نماید از نتایج دو روش دیگر تعداد بیشتری باکتری را نشان داد. حساسیت روش به کار رفته در این مطالعه جهت جستجوی تعداد اندک استافیلوکوکوس اورئوس (کمتر از 10سلول در گرم) قابل ملاحظه به نظر می رسد.

 نتیجه گیری نهایی:

یافته ها نشان داد که استفاده از PCR در ترکیب با  PMAنتایج قابل اعتماد تری نسبت به روش معمولی کشت حاصل می نماید. با توجه به مدت زمان کوتاه حصول نتایج، اختصاصی بودن و حساسیت قابل ملاحظه این روش امید است در آینده نزدیک در آزمایشگاه های کنترل کیفیت مواد غذایی دستگاه های نظارتی به کار گرفته شود.