روش بهینه سازی شده جداسازی و تخلیص DNA از جنس Alchemilla با استفاده از پلی اتیلن گلیکول

استخراج DNA برای مطالعات مولکولی ضروری بوده و استخراج خالص آن از گیاهان با مقادیر زیاد متابولیت های ثانویه بسیار مشکل است. جنس Alchemiila L. متابولیت های ثانویه متنوعی تولید می کند که باعث کاهش کیفیت DNA استخراجی می شوند. این مطالعه، با هدف استخراج آسان و ارزان DNA با کمیت و کیفیت بالا از نمونه های برگ این جنس انجام شد و نهایتا، سه روش استخراج DNA با هم مقایسه گردیدند. در انتخاب روش بهینه چند نکته اساسی مد نظر بود که شامل هزینه، سادگی و حذف مواد شیمیایی خطرناک می باشد. این مطالعه، با ایجاد تغییرات قابل توجهی در روش CTAB از قبیل تغییر حجم و غلظت بافر استخراج، مدت زمان انکوباسیون ها، انجام شش مرحله شستشو و سه مرحله رسوب، افزودن پلی اتیلن گلیکول و همچنین حذف مواد پرهزینه و خطرناک مانند نیتروژن مایع و بتا مرکاپتواتانول، قادر به جداسازی ایمن و ارزان، مقدار زیادی DNA با کیفیت مطلوب شد. کمیت و کیفیت DNAهای استخراجی توسط روش نانومتری، الکتروفورز ژل آگارز و واکنش زنجیره ای پلیمراز مشخص گردید. طبق نتایج به دست آمده در این مطالعه، نسبت 280/260 DNA استخراجی به روش بهینه سازی شده، بین 75/1 تا 82/1و نسبت 230/260 بین 56/1 تا 68/1 با غلظت 387 تا 595 نانوگرم در میکرولیتر اندازه گیری شد که این اعداد به طور قابل توجهی (p < 0.001) از اعداد مربوط به DNA حاصل از سایر روش ها بیشتر بود. پروتکل بهینه سازی شده، ساده، موثر، قابل تکرار، نسبتا غیرسمی و ارزان بود. نتایج این تحقیق همچنین نشان داد پروتکل مذکور در تولید مقادیر کافی از DNA با کیفیت قابل قبول برای سنجش های ژنتیکی موفق بود.