مقایسه دو روش MTT و تریپان بلو در تعیین بقای رده سلولی Vero در آلودگی با HSV-1

ارزیابی بقای سلولی در مطالعه های سلولی مهم است و نتیجه حاصله برای کاربرد ماده مورد آزمایش تعیین کننده است. امروزه از روش های مختلفی برای ارزیابی بقای سلولی استفاده می گردد و وجود همبستگی بین روش ها دارای اهمیت است. در این مطالعه، از سل لاینVero  برای بررسی اثرات ویروس HSV-1 بر بقای سلولی استفاده شد. بقای سلولی پس از آلودگی با HSV-1 با استفاده از روش های حساس رنگ سنجی MTT و تریپان بلو بر روی سل لاین Vero مورد بررسی قرار گرفت.

مواد و روش ها

مطالعه کیفی انجام پذیرفته بر روی رده سلولی Vero آلوده به ویروس HSV-1 با رقت های لگاریتمی طی مدت 24 ساعت در محیط DMEM حاوی 2% سرم جنین گاوی انجام گرفت و سپس زنده مانی سلولی توسط روش های رنگ سنجیMTT  و تریپان بلو در رقت های 1-10 تا 5-10 و فواصل زمانی 0و 4 و8 و 18 و 24 ساعت بررسی شد و درصد بقا جهت رسم منحنی بقای سنجش استفاده گردید.

یافته ها

رقت های مختلف ویروسی جهت تعیین دوز 50 درصد آلودگی TCID50 سلول با ویروس HSV-1 با میکروسکوپ اینورت انجام شد. هم چنین داروی آسیکلویر با غلظت 50 میلی گرم بر میلی لیتر به عنوان کنترل با روش های MTT و تریپان بلو، مقایسه شد. نتایج تحلیل رگرسیون بقای سلولی، نشان داد؛ همبستگی خطی، مثبت و معنادار بین روش ها مشاهده شده است یعنی بین روش های MTT و تریپان بلو همبستگی وجود داشت (001/0 p< ، 9/0 r=).

نتایج نشان دادند، هر دو روش برای تعیین بقای سلولی قابل استفاده بوده و نتایج روش تریپان بلو قابل تایید با روش MTT می باشد.