کلون و بیان پروتئین حدت CFP-10 مایکوباکتریوم بویس سویه AN5

سل گاوی به وسیله گونه مایکوباکتریوم بویس ایجاد می شود و اثرات مهمی در بهداشت عمومی و اقتصادی از جمله تجارت حیوانات و تولید دارد. برنامه کنترل مرسوم براساس آزمایش پوستی و کشتار گاوهای آلوده به سل است. علی رغم اعتماد به این آزمایش، واکنش های مثبت کاذب از معایب آن به شمار می رود که جهت رفع آن استفاده از پروتئین هایی با ویژگی بالاتر توصیه می گردد.

مطالعه حاضر به منظور کلون، بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب CFP-10 به عنوان آنتی ژن مایکوباکتریوم بویس صورت گرفت.

روش ‎کار:

 ژن پروتئین CFP-10 با استفاده از تکنیک واکنش زنجیره پلی مراز تکثیر شد. محصول واکنش پس از هضم توسط دو آنزیم EcoRI و HindIII در وکتور pET23a (+) کلون شد و بعد از ترانسفورماسیون در سلول DH5α E. coli تکثیر گردید. پس از الحاق و تعیین توالی، وکتور کلون شده در سلول بیانی BL21 E. coli ترانسفورم شد. جهت القاء، از ایزپروپیل-دی-بتا-تیوگالاکتوپیرانوزید استفاده گردید. جهت انحلال اجسام توده ای در پلت سلولی از اوره 8 مولار استفاده شد. پس از تخلیص پروتئین نوترکیب با رزین نیکل، حذف اوره با گرادیان کاهنده انجام گرفت.

صحت کلون ژن CFP-10 با تعیین توالی اثبات گردید. بیان پروتئین CFP-10 با استفاده از مونوکلونال آنتی بادی اختصاصی با وسترن بلاتینگ اثبات شد. نتایج تعیین توالی ژن در کنار وسترن بلاتینگ، حاکی از آن بود که پروتئین نوترکیب بدست آمده در وزن مولکولی حدود 10 کیلو دالتون به خوبی بیان و تخلیص گردیده است.

نتیجه گیری نهایی:

 نتایج نشان داد که ژنcfp-10  به خوبی در سیستم پروکاریوتی کلون، بیان گردید و پروتئین CFP-10 می تواند جهت مطالعات بیشتر در تولید کیت های تشخیصی علیه سل گاوی مورد استفاده قرار گیرد.