بررسی اثرات درمانی حذف lncRNA NEAT1 و القای آپوپتوز در رده سلولی سرطان پروستات با استفاده از CRISPR/Cas9

 lncRNA (Long non-coding ribonucleic acid) به عنوان کنترل کننده اساسی ژن ها و مارکرهای پیش آگهی در سرطان های مختلف شناسایی شده است. در این مطالعه، اثر تخریب NEAT1 lncRNA (Nuclear Paraspeckle Assembly Transcript 1) با استفاده از سیستم CRISPR/Cas9 (Clustered regularly interspaced short palindromic repeats/ CRISPR associated protein 9) در رده سلولی PC-3 مورد بررسی قرار گرفت.

مواد و روش ها: 

در این مطالعه تجربی، پلاسمیدهای نوترکیب حامل sgRNA (Single guide RNA) در سیستم CRISPR طراحی و ساخته شدند. سلول های رده سرطان پروستات PC-3 با وکتورهای نوترکیب، ترانسفکت شده و میزان بیان ژن های مرتبط با آپوپتوز با استفاده از روش q-PCR (Quantitative polymerase chain reaction) سنجیده شد. از آزمون های انکسین، MTT و خراش سلولی به ترتیب برای بررسی فعالیت های آپوپتوزی، زیستایی و تکثیر سلولی و مهاجرت سلولی استفاده گردید.

یافته ها: 

تخریب ژن NEAT1 با روش CRISPR/Cas9 سبب تغییرات محسوس در بیان ژن های مرتبط با آپوپتوز گردید؛ به طوری که بیان ژن های P21، BCL2 و BIRC5 کاهش یافت و بیان P53 و BAX افزایش پیدا کرد. علاوه براین در سلول های گروه تیمار، میزان تکثیر و مهاجرت سلولی نسبت به گروه کنترل کاسته شد. افزایش آپوپتوز در سلول های ویرایش ژن شده نسبت به گروه کنترل مشاهده گردید.

نتیجه گیری: 

NEAT1 به عنوان یک انکوژن، نقش مهمی در تومورزایی دارد و تخریب آن سبب کاهش بقا و مهاجرت سلولی و نیز افزایش آپوپتوز سلول های سرطانی می شود.