معرفی یک روش بهینه تخلیص DNA ژنومی توکسوپلاسما گوندی از مغز موش صحرایی جهت افزایش کارایی تشخیص عفونت توکسوپلاسما

استخراج DNA ژنومی توکسوپلاسما گوندی از مغز موش صحرایی به دلیل میزان ناچیز آلودگی و چربی زیاد مغز چالش برانگیز است. واکنش کمی زنجیره ای پلیمراز در زمان واقعی (RT-qPCR) علیرغم تشخیص مقادیر ناچیز ژن هنوز با نتایج منفی-کاذب همراه است. ما با تغییر روش استخراج DNA از بافت مغز موش توانستیم تعداد موارد منفی-کاذب آلودگی به توکسوپلاسما گوندی را کاهش دهیم.

از مغز یازده موش (نر ویستار) آلوده به سوش تهران انگل توکسوپلاسما (در هفته هشتم آلودگی) و سه موش غیر آلوده استفاده شد. جهت تخلیص DNA بجای 20 میلی گرم مغز (روش معمولی) کل مغز استفاده شد. میزان آنزیم پروتییناز کا دو برابر و مدت انکوباسیون شش برابر روش معمول شد. سپس میزان DNA نمونه ها با روش RT-qPCR اندازه گیری شد.

با روش رایج از یازده موش آلوده فقط سه موش مثبت شدند در حالی که با بهینه سازی تخلیص DNA، نه موش مثبت تشخیص داده شدند.