یک روش کاربردی نوین برای تخلیص توکسین اپسیلون باکتری کلستریدیوم پرفرنژنس تیپ D، توسط کروماتوگرافی اندازه طردی (SEC) و اولترافیلتراسیون (UF)

سمیت بالقوه بالای توکسین اپسیلون تولید شده توسط باکتری کلستریدیوم پر فرنژنس ((Clostridium perfringens تیپ D، آن را به سومین سم کشنده کلستریدیال پس از بوتولینوم و کزاز تبدیل کرده است، بنابراین داشتن توکسین خالص و غلیظ اهمیت زیادی دارد.

هدف از این مطالعه خالص سازی توکسین اپسیلون تا حد ممکن با اجرای پروتکل های کاربردی، مقرون به صرفه، چند مرحله ای و در کمترین زمان بود.

تصفیه توکسین اپسیلون در چندین مرحله متوالی انجام شد; رسوب سولفات آمونیوم، دیالیز، کروماتوگرافی اندازه طردی با استفاده از ستون Sephadex-G50 ، دو مرحله تغلیظ و اولترافیلتراسیون. فعالیت توکسین اپسیلون پس از مراحل مختلف با توجه به روش عملیاتی استاندارد با محاسبه حداقل دوز کشنده (MLD) تعیین شد. میزان توکسین با استفاده از روش Lowry و حضور و اختصاصیت آن نیز توسط SDS-PAGE و وسترن بلات پیگیری شد. در نهایت، ارزیابی خلوص توکسین اپسیلون با اجرای الکتروفورز مویرگی صورت گرفت.

توکسین اپسیلون خالص یک باند واحد، در حدود 32.9 کیلو دالتون در SDS-PAGE و وسترن بلات تشکیل داد. غلظت خالص توکسین اپسیلون، mg/ml3.9 محاسبه شد و میزان MLD آن، رقت 24000/1 پس از مرحله اولترافیلتراسیون بود. فرآیندهای تصفیه ارایه شده جهت تخلیص توکسین، منجر به تغلیظ آن تا fold 87 و خلوص 88.6 درصد شد.

با توجه به خلوص بالای توکسین اپسیلون، فرایند های مورد استفاده در این مطالعه می تواند دانش فنی تولید توکسین در مقیاس صنعتی را فراهم کند که می تواند در تولید واکسن توکسویید کلستریدیدیال، همچنین کنترل کیفیت و یا آزمایشات تشخیصی استفاده شود.