طراحی روش واکنش زنجیره پلیمراز جهت تشخیص باکتری Bartonella quintana از بیماران مبتلا به اندوکاریت کشت خون منفی

  Bartonella quintana باکتری گرم منفی است که ایجاد کننده بیماری Trench fever است. باکتری می تواند از عوامل ایجاد کننده اندوکاردیت باشد. اندوکاردیت باکتریایی بیماری خطرناک و گاه کشنده ای است. تشخیص به موقع و سریع باکتری با روش های مولکولی مانند PCR حایز اهمیت می باشد. در این مطالعه، آلودگی موارد مبتلا به باکتری B. quintana با روش PCR مورد بررسی قرار گرفت.

  نمونه های اندوکاردیت کشت منفی از بیماران جمع آوری شد. PCR، انجام گرفت و ژنftsz  تکثیر و جداسازی شد. نمونه هایی اندوکاردیت تعیین توالی شدند. نمونه کنترل مثبت سنتز شد و درون وکتور PUC 18 آماده گردید. تعیین ویژگی برای باکتری ها انجام گرفت و ژن کلون گردید. جهت تایید کلونینگ، کلنی PCR انجام گرفت. پلاسمیدها، استخراج شدند و در نهایت حساسیت و حد تشخیص تعیین گردید.

  تعیین توالی نشان داد که نمونه ها مربوط به باکتری های کلبیسلا پنومونیه بودند. به منظور بررسی ویژگی، هیچ باندی روی ژل آگارز مشاهده نگردید. این موضوع نشان داد که پرایمرهای طراحی شده فقط به باکتری مورد نظر متصل می شود. آخرین رقت پلاسمید با غلظت ng/µl780 که باند قابل تشخیصی را در روی ژل ایجاد نمود، 7-10 و کمترین تعداد کپی قابل تشخیص در PCR  برابر 24 کپی محاسبه گردید.

نتیجه گیری: 

 در سال های اخیر تلاش زیادی برای توسعه روش های مولکولی سریع و خاص برای تشخیص بارتونلا انجام شده است. به نظر می رسد روش PCR ابزار مفیدی است که ممکن است زمان تشخیص B. quintana را در طول عفونت های سیستمیک، مانند اندوکاریت کاهش دهد.