طراحی کیت تشخیص Coxiella burneiti از بیماران مبتلا به اندوکاردیت عفونی با استفاده از PCR

  Coxiella burnetii عامل بیماری Query Fever است. Query Fever یک بیماری زیونوز و اندمیک با گسترش جهانی است. Query Fever در می تواند به عنوان یک پنومونی یا اندوکاردیت ظاهر گردد. با توجه به فقدان آمار از درصد آلودگی به C. burnetii در بیمارستان های ایران و همچنین مقاومت بسیار زیاد این باکتری، بررسی وجود آلودگی های بیمارستانی به این باکتری حایز اهمیت می گردد. هدف از این مطالعه تشخیص مولکولی باکتری های C. burnetii ایجادکننده اندوکاردیت عفونی از بیمارستان های ارتش بود.

  نمونه های اندوکاردیت کشت منفی از بیماران جمع آوری شد. PCR، انجام گرفت و ژنIs1111  تکثیر و جداسازی شد. نمونه هایی اندوکاردیت تعیین توالی شدند. نمونه کنترل مثبت سنتز شد و درون وکتور PUC 18 آماده گردید. تعیین ویژگی برای باکتری ها انجام گرفت و ژن کلون گردید. جهت تایید کلونینگ، کلنی PCR انجام گرفت. پلاسمیدها، استخراج شدند و در نهایت حساسیت و حد تشخیص تعیین گردید.

  تعیین توالی نشان داد که نمونه ها مربوط به باکتری های کلبیسلا پنومونیه بودند. به منظور بررسی ویژگی، هیچ باندی روی ژل آگارز مشاهده نگردید. این موضوع نشان داد که پرایمرهای طراحی شده فقط به باکتری مورد نظر متصل می شود. آخرین رقت پلاسمید با غلظت  ng/µl700 که باند قابل تشخیصی را در روی ژل ایجاد نمود، 7-10 و کمترین تعداد کپی قابل تشخیص در PCR  برابر 22 کپی محاسبه گردید.

نتیجه گیری: 

 در سال های اخیر تلاش زیادی برای توسعه روش های مولکولی سریع و خاص برای تشخیص C. burnetii انجام شده است. به نظر می رسد روش PCR ابزار مفیدی است که ممکن است زمان تشخیص C. burnetii را در طول عفونت های سیستمیک، مانند اندوکاریت کاهش دهد.