راه اندازی پانل تشخیصی سنجش بار ویروسی و وضعیت فیزیکی ژنوم ویروس پاپیلومای انسانی تیپ 16 به روش Multiplex Real-Time PCR

 افزایش بار ویروسی در زنان با عفونت مزمن ویروس پاپیلومای انسانی تیپ 16 (Human Papilloma Virus 16) و الحاق ژنوم ویروس در کروموزم سلولی با افزایش شیوع ضایعات پیش بدخیم/بدخیم در دهانه رحم مرتبط است. در این مطالعه مراحل راه اندازی پانل تشخیصی سنجش بار ویروسی و وضعیت فیزیکی ژنوم HPV16 بر روش Multiplex Real-Time PCR تشریح شده است.

 در این پژوهش یک ناحیه محافظت شده از ژن های E6 و E2 ویروس HPV16 پس از استخراج از رده سلولی CaSki و تکثیر با روش PCR در پلاسمید باکتریایی pJET1.2/blunt cloning vector کلون شده و همراه با پلاسمید نوترکیب حاوی ناحیه محافظت شده از ژن سلولی RnaseP به عنوان استاندارد جهت سنجش کمی میزان بار ویروسی به صورت کپی در هر سلول و در نهایت تعیین وضعیت فیزیکی ژنوم ویروس با روش Multiplex Real-Time PCR مورد استفاده قرار گرفت.

 در نتایج Real Time PCR شاخص های اختصاصیت، ضریب R2، شیب و کارایی در محدوده معیارهای پذیرش قرار داشته که نشان می دهد ژن های E2 و E6 ویروس HPV16 و ژن سلولی RnaseP با خطی بودن خوب شناسایی می شوند. نتایج نسبت E2/E6 در سلول های CaSki در مطالعه حاضر (E2/E6 ratio=0.15) بیانگر حضور ترکیبی از ژنوم های اپیزومال و الحاق شده (Mixed) در این رده سلولی بود.

 نتایج به دست آمده در این مطالعه نشان می دهد پانل تشخیصی طراحی شده برای سنجش بار ویروسی و وضعیت فیزیکی ژنوم HPV16 بر روش Multiplex Real-Time PCR از خطی بودن، حساسیت و اختصاصیت مناسبی مطابق معیارهای پذیرش از پیش تعیین شده برخوردار بود.