دست کاری ژنتیکی باکتری پروبیوتیک لاکتوکوکوس لاکتیس به منظور تولید پروتئین OMP10 بروسلا آبورتوس

در تمام گونه های باکتری بروسلا، توالی ژن Omp10 حفاظت شده است. خاصیت آنتی ژنیسیته بالای محصول این ژن می تواند باعث تحریک سیستم ایمنی میزبان شود. استفاده از باکتری پروبیوتیک لاکتوکوکوس لاکتیس به عنوان حامل زنده علاوه بر ایمن بودن، برای تولید پروتیین های نوترکیب و انتقال ژن به سلول های یوکاریوتی مناسب است. OMP10 جزیی از لیپوپروتیین های سطحی در غشای خارجی بروسلا با خاصیت ایمنی زایی بسیار بالا است که در جذب مواد مغذی، انتقال سیگنال، چسبندگی و مقاومت آنتی بیوتیکی نقش اساسی دارد. این پروتیین دارای خواص آنتی ژنیک بوده و می تواند به صورت متصل با آنتی ژن های دیگر، دارای نقش کمکی باشد. لذا هدف از این تحقیق ایجاد باکتری پروبیوتیک لاکتوکوکوس لاکتیس به منظور تولید پروتیین OMP10 بروسلا آبورتوس می باشد.

ژن Omp10 باکتری بروسلا آبورتوس همراه با سیگنال پپتید Usp45 به صورت سنتتیک در وکتور pNZ8148 کلون شد. وکتور نوترکیب ابتدا در باکتری اشریشیاکلی سویه ی TOP10 تکثیر و سپس توسط کیت استخراج پلاسمید خالص سازی شد. غلظت پلاسمید استخراج شده توسط نانودراپ سنجیده شد. pNZ8148-Usp45-Omp10 توسط روش الکتروپوریشن، به درون باکتری لاکتوکوکوس لاکتیس ترانسفورم شد. تایید کلونینگ و بررسی بیان ژن Omp10 توسط تکنیک های RT-PCR، هضم آنزیمی و SDS-PAGE انجام گرفت.

نتایج نشان دهنده بیان موفقیت آمیز ژن هدف Omp10 در باکتری پروبیوتیک لاکتوکوکوس لاکتیس بود و پروتیین نوترکیب به خوبی در این باکتری پروبیوتیک بیان شد.

پژوهش حاضر نشان داد که پروتیین Omp10 در باکتری پروبیوتیک لاکتوکوکوس لاکتیس ترانسفورم شده توسط الکتروپوریشن با وکتور نوترکیب pNZ8148-Usp45-Omp10 بیان می شود. لاکتوکوکوس لاکتیس ترانسفورم شده در مطالعه حاضر، می تواند در مطالعات آینده به عنوان واکسن زیر واحد خوراکی جهت پیشگیری از بروسلوز، مناسب باشد.