تولید و تخلیص HBcAg نوترکیب ویروس هپاتیت ب و بررسی ویژگی های ساختاری و عملکردی آن

بیماری هپاتیت ب یکی از معضلات بهداشتی و یک عفونت تهدید کننده زندگی است که توسط ویروس HBV ایجاد میشود. نوکلیوکپسید HBV از زنجی ره پلی پپتیدی منفردی به نام آنتی ژن core ،یا HBcAg تشکیل شده است. در تحقیقات متعدد از HBcAg به عنوان حامل داروها و سایر مولکولهای زیستی استفاده میشود و آنتی بادی تولید شده بر ضد آن نیز به عنوان یکی از نشانگرهای سرولوژیکی، نقش مهمی در بررسی مواجه قبلی با این بیماری دارد. در این مطالعه، برای اولین بار وکتور pColdI ،حاوی برچسب هیستیدینی، برای کلونسازی ژن HBcAg مورد استفاده قرار گرفت. باالترین سطح بیان HBcAg در سویه Tuner و سپس درBL21 و gami-Rosetta مشاهده شد. HBcAg متصل به برچسب هیستیدین با استفاده از ستون NTA-Ni خالص ساز ی شد و شباهت ساختاری و آنتی ژن ی آن با شکل طبیعی توسط ELISA و وسترن بالت تایید شد. سپس، از HBcAg نوترکیب برای تولید آنتی بادیهای پل ی کلونال ضد HBc در خرگوش استفاده شد و برای تخلیص آنتی بادی های پلی کلونال ضد HBcAg ،از ستون میل ترکیبی سفارز CNBr-HBcAg استفاده شد. نتایج نشان داد که آنتی بادی های به دست آمده از خرگوش قادر به شناسایی HBcAg نوترکیب تولید شده تا غلظت 15/0 نانوگرم در میلیلیتر در آزمایش االیزا ساندویچ بودند. ای ن مطالعه اطالعات ارزشمندی را برای تولید پروتیین HBcAg نوترکیب و آنتی بادیهای اختصاصی برای تحقیقات بیشتر و کاربردهای تشخیصی ارایه میدهد