دودمانه سلولی تغییر ژنتیکی یافته فیبروبلاست پوست ختنه گاه انسان (YhFF#8) با بیان پایدار ژن Cas9: یک گزارش منبع آزمایشگاهی

رده های سلولی بیان کننده پایدار  Cas9(پروتیین 9 مرتبط با CRISPR) به عنوان ابزار ارزشمندی در تحقیقات ژنتیکی پدیدار شده اند که کارایی سیستم CRISPR/Cas9 را افزایش داده و روش های ویرایش ژن را ساده می کنند. این دودمان های سلولی امکان ویرایش همزمان چندین ژن را فراهم کرده و زمان کلی ویرایش را کاهش می دهد.

این مطالعه با هدف ایجاد یک رده سلولی فیبروبلاست انسانی پایدار با قابلیت تبدیل ژنتیکی به شکل جهش یافته، به عنوان یک مدل سلولی برای یک بیماری ژنتیکی خاص انجام شد. خط سلولی ایجاد شده بررسی مکانیسم های بیماری، آزمایش درمان های بالقوه، و به دست آوردن بینش در مورد فرآیندهای مولکولی اساسی را تسهیل می کند.

سلول های 293LTV کلیه جنینی انسان (HEK293LTV) برای تولید ذرات شبه ویروس مورد استفاده قرار گرفتند و سلول های فیبروبلاست پوست ختنه گاه انسان یزد از سلول های دسته 8 (YhFF#8) برای تغییرات ژنتیکی هدف قرار گرفتند. ترانزفکشن سلول های HEK293LTV با DNA پلاسمیدی نوترکیب pCDH-Cas9 باعث تولید ذرات شبه ویروسی شد. سلول های YhFF#8 ترانزداکت شده با استفاده از آنتی بیوتیک پورومایسین تحت انتخاب قرار گرفتند. درخشش پروتیین فلورسنت سبز (GFP) در سلول های ترانزداکت شده قبل و بعد از انتخاب آنتی بیوتیکی سلول ها تصویربرداری شد. در ضمن سطح بیان نسبی ژن Cas9 در مقایسه با ژن های GFP و GAPDH با روش کمی (qPCR) تعیین گردید.

این مطالعه صحت توالی کاست ژن Cas9 و فعالیت رونویسی آن را تایید کرد. سلول های YhFF#8 ترانزداکت شده، فلورسانس سبز نشان داده و با انتخاب آنتی بیوتیکی که منجر به خالص سازی تقریبا 100% سلول های تبدیل شده شد. بیان ژن GFP با استفاده از میکروسکوپ فلورسانس، امکان رصد زنده سلول های YhFF#8-Cas9-GFP-PuroR را در محیط کشت را فراهم کرد.

سلول های YhFF#8-Cas9-GFP-PuroR، برچسب گذاری شده و مستعد برای انجام فرایند ویرایش ژنومی، منبع بهینه ای برای تولید رده های سلول های بنیادی پرتوان القایی برای تحقیقات زیست پزشکی آینده فراهم می کنند.